NCI-H358是一种人非小细胞肺癌细胞系，源自一名患有细支气管肺泡癌的患者的肿瘤组织。NCI-H358细胞系是在1981年从一位尚未开始化疗的患者的肿瘤组织中分离并建立，保留了原始肿瘤的特性，未受化疗药物的影响。NCI-H358细胞系来源于肺部，特别是细支气管和肺泡区域。

NCI-H358细胞具有以下特性和特征

• 分子特征：细胞质中含有Clara细胞的特征结构，这是通过超微结构研究发现的；

• 生长特征：形态呈上皮细胞样；贴壁生长；在软琼脂中的克隆形成效率为0.83%

• 表达特征：表达SP-A蛋白和RNA，这是一种重要的肺表面活性蛋白；不表达SP-B和SP-C，这两种也是肺表面活性蛋白；

• 其他特性：被归类为非小细胞肺癌细胞系；保留了原始肿瘤的某些特征，如Clara细胞的特征结构；

• NCIH358细胞在无胸腺裸鼠体内会产生肿瘤。

NCIH358细胞参数表

细胞名称	NCIH358细胞（人非小细胞肺癌细胞系）
细胞别称	NCI-H358; h358; H-358; NCIH358
组织来源	人肺（细支气管及肺泡）
患者疾病信息	肺癌（细支气管肺泡癌）男性，未经化疗
细胞形态	上皮细胞样 / 贴壁生长
建株时间	1981年
推荐培养基	RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S 或DMEM/F12 + 10% FBS
培养环境	37℃ / 95%空气 + 5% CO2
传代比例	1:3-1:6
换液频率	每2-3天一次
传代/倍增时间	24-48小时 / 约38-60小时
贴壁时间	约4-6小时
细胞消化	0.25% 胰蛋白酶-EDTA溶液，约3-5分钟消化（37℃）
冻存条件	60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO / 液氮（-196℃）
冻存浓度	1-2 × 10^6 cells/mL
生物安全等级	1级
质量控制	支原体检测阴性，STR鉴定正确
克隆形成效率	软琼脂中0.83%
染色体数目	近二倍体
致瘤性	在无胸腺裸鼠中可形成肿瘤
细胞质特征	Clara细胞特征结构
蛋白表达 / 不表达	表达SP-A蛋白和RNA / 不表达SP-B和SP-C
基因特征	KRAS突变（G12C），p53野生型
实验应用	药物筛选，信号通路研究 ； 异种移植模型
转染效率	中等（具体数值需实验确定）
细胞大小	约15-20μm（直径）
核质比	约1:2-1:3
药物敏感性	EGFR抑制剂相对耐药；MEK抑制剂敏感；

NCIH358人非小细胞肺癌细胞系培养教程

NCI-H358细胞复苏步骤

• 将冻存的NCI-H358细胞快速解冻（37℃水浴，1-2 分钟）。

• 将细胞悬液转移到含有完全培养基的离心管中。

• 以 1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。

• 用预热的完全培养基重悬NCI-H358细胞。

• 将NCI-H358细胞转移到培养瓶中，并置于培养箱内培养。

NCI-H358细胞的日常培养

• 每 2-3 天换液一次。

• 当细胞密度达到 70%-80% 时进行传代。

• 传代比例：1:3-1:6。

NCI-H358细胞传代步骤

• 弃去旧培养基。

• 用 PBS 洗涤NCI-H358细胞 1-2 次。

• 加入 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 溶液，37℃ 消化 3-5 分钟。

• 显微镜下观察NCI-H358细胞脱落情况。

• 加入等体积的完全培养基终止消化。

• 以 1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。

• 用新鲜完全培养基重悬NCI-H358细胞。

• 按传代比例将NCI-H358细胞接种到新培养瓶中。

NCI-H358细胞冻存步骤

• 制备冻存液：60% 基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO。

• 收集对数生长期的NCI-H358细胞。

• 以 1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清。

• 用冻存液重悬NCI-H358细胞，调整浓度至 1-2 × 10^6 cells/mL。

• 将NCI-H358细胞悬液分装到冻存管中。

• 使用程序降温盒将NCI-H358细胞缓慢降温至 -80℃。

• 24 小时后转移到液氮中长期保存。

注意事项

• 首次传代建议使用 1:2 的比例。

• 定期观察NCI-H358细胞形态和生长状况。

• 保持无菌操作，预防污染。

• 定期进行支原体检测。

• 建议使用低代次（<20 代）的NCI-H358细胞进行实验。

NCI-H358细胞传代频率调整

• 标准传代周期：24-48 小时。

• 传代比例：1:3-1:6。

• 传代时机：当细胞密度达到 70%-80% 时进行传代。

• 调整建议：

• 如果NCI-H358细胞生长较快，可以增加传代比例或缩短传代周期。

• 如果NCI-H358细胞生长较慢，可以减少传代比例或延长传代周期。

• 首次传代建议使用 1:2 的比例，观察NCI-H358细胞适应情况。

不同培养条件下NCI-H358细胞的表现

• 温度变化：低于 37℃ 可能导致NCI-H358细胞生长减缓，高于 37℃ 可能加速生长但增加死亡率。

• CO2 浓度：低于 5% 可能导致培养基 pH 升高，影响NCI-H358细胞生长；高于 5% 可能导致 pH 降低。

• 血清浓度：降低血清浓度可能减缓NCI-H358细胞生长，提高血清浓度可能加速生长。

• 培养基类型：推荐使用 RPMI-1640，但NCI-H358细胞在其他培养基（如 DMEM）中可能生长，但生长特性可能有所不同。