小鼠心肌细胞（原代细胞）

原代小鼠心肌细胞是从实验小鼠（如C57BL/6J品系）心脏组织中分离获得的一类细胞，广泛应用于心血管疾病研究及基础生物医学领域。

小鼠心肌细胞通常来源于左心室，通过胶原酶和Dispase联合酶解技术在无菌条件下分离，能够保持来源组织的生物学特性，包括节律性搏动和特定的电生理活动。分离出的心肌细胞形态多样，呈梭形、多边形或菱形，在贴壁培养2小时后逐渐附着，并在培养12小时后开始伸出伪足，48小时后部分细胞呈掌状并出现节律性搏动。作为终末分化细胞，心肌细胞在体外不增殖，但其结构和功能特性得以维持，实验操作简便且重复性好，小鼠心肌细胞适用于心肌肥厚、信号通路、缺血预处理等基础研究，以及生物力学分析、药物筛选、安全性评价等应用。

小鼠心肌细胞特性特征

小鼠心肌细胞在体外不具备增殖能力，属于终末分化细胞，但能够维持其生理功能。
心肌细胞具有独特的电生理活动，包括动作电位的产生和传导，这对于心脏的正常功能至关重要。
原代小鼠心肌细胞表达多种与心脏发育和功能相关的基因，如肌动蛋白（Actin）、**肌球蛋白（Myosin）**等。
小鼠心肌细胞还表达一些关键的转录因子，如GATA4和NKX2-5，它们在心脏发育和功能维持中起着重要作用。
心肌细胞常见的标志物包括心肌特异性蛋白（如Troponin T、α-Actinin）。
信号通路：心肌细胞在响应不同刺激时涉及多个信号通路，包括TGF-β信号通路、Wnt/β-catenin信号通路等，这些通路在心脏病理状态下尤为重要

小鼠心肌细胞参数表

细胞名称	原代小鼠心肌细胞（Primary Mouse Cardiomyocytes）
英文名称	Mouse Cardiomyocyte Cells
种属来源	小鼠（Mus musculus）
组织来源	心脏组织
细胞形态	短柱状，通常只有一个细胞核，细胞间有闰盘结构
纯度	≥90%
细胞直径	15-30 µm
生长特性	贴壁生长
细胞核特征	核大而明显，均匀分布
培养基	原代细胞专用培养基
培养条件	温度：37°C；气相：95%空气 + 5% CO₂
传代次数	属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
换液频率	每2-3天更换一次
贴壁时间	约2小时开始贴壁，12小时基本完成
生长周期	通常在5-7天内达到融合状态
自发性节律搏动	是
标志物	肌球蛋白重链（MHC）、α-肌动蛋白（α-SMA）
胶原合成	合成I型和III型胶原，主要成分占比90%以上
生长因子相关基因	TGF-β、FGF等
胶原合成相关基因	COL1A1、COL3A1
信号通路	TGF-β信号通路、Wnt/β-catenin信号通路
支持作用	对心肌细胞提供结构支持
修复能力	在心脏损伤时产生旁分泌生长因子，促进修复
转化能力	可转化为肌成纤维细胞，参与心脏纤维化过程
细胞质特征	嗜弱碱性，具有明显的蛋白质合成与分泌活动
注意事项	建议用多聚赖氨酸 PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）对接种培养皿包被处理

培养教程

小鼠心肌细胞原代培养教程

小鼠心肌细胞复苏

解冻细胞：将装有小鼠心肌细胞的冻存管迅速置于37°C水浴中，轻轻摇晃使细胞完全融化（通常1-2分钟内完成）。
稀释细胞：解冻后的小鼠心肌细胞悬液转移至离心管，加入4-6 mL完全培养基，轻轻混匀。
离心：以1000 rpm离心3-5分钟，去除上清液。
重悬细胞：用完全培养基重悬小鼠心肌细胞，使细胞分散均匀。
接种：将细胞悬液移至T25培养瓶，加入6-8 mL完全培养基，置于37°C、5% CO₂培养箱中培养。
观察：次日使用显微镜检查小鼠心肌细胞贴壁情况，换新鲜培养基以去除非贴壁细胞。

小鼠心肌细胞传代

洗涤：弃去旧培养基，用PBS清洗小鼠心肌细胞1-2次以去除残留物和死细胞。
消化：加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液（T25瓶约1-2 mL），置于37°C培养箱中消化1-2分钟，观察小鼠心肌细胞状态，细胞变圆脱落时及时终止消化。
终止消化：加入3-4 mL完全培养基终止酶作用，轻轻吹打使细胞完全脱离。
离心：以1000 rpm离心3-5分钟，弃上清液。
重悬和接种：用新鲜培养基重悬小鼠心肌细胞，按照1:2或1:5比例接种到新的培养瓶，加入适量完全培养基继续培养。

小鼠心肌细胞冻存

细胞收集：按照传代步骤收集消化后的小鼠心肌细胞，用血球计数板计数细胞数，冻存密度建议为1×10⁶至1×10⁷个活细胞/mL。
离心和重悬：以1000 rpm离心3-5分钟，去除上清，用冻存液重悬小鼠心肌细胞。
分装与标记：将小鼠心肌细胞悬液分装至冻存管，标注细胞名称、代数及冻存日期。
降温：将冻存管置于程序降温盒中，以-1°C/min速率降至-80°C，然后转入液氮中长期保存。
位置记录：记录冻存管在液氮容器中的位置，以便后续使用。