小鼠表皮角质形成细胞来源于皮肤组织，具有合成角质蛋白的功能。

角质形成细胞是表皮的主要细胞成分，起始于表皮深层并逐渐增殖、分化。在角化过程中，角质形成细胞的细胞核和细胞器会完全消失，细胞失去生理功能并最终脱落。

小鼠表皮角质形成细胞特征

• 表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。

• 表皮由复层扁平上皮构成，从基底层到表面可分为五层，包括基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。

• 表皮角质形成细胞是一种能合成角质蛋白的上皮细胞，为表皮的主体，从表皮深层开始逐渐增殖、分化。

• 角质形成细胞在角化过程中，细胞核与细胞器完全消失，细胞失去生理功能并脱落。

• 表皮角质形成细胞主要分布于表皮基底层，随着细胞程序性死亡后，细胞向表皮产生角化并移动。

• 角质形成细胞最终产生角质蛋白，在角化过程中，一般可分为四层：基底层、棘层、颗粒层和角质层。

• 角质形成细胞分化成熟表现为从基底层向角质层的逐渐移行。

• 些部位，特别是掌跖部位，角质层下方还可见到透明层。

小鼠表皮角质形成细胞参数表

小鼠表皮角质形成细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈上皮细胞样。在标准操作流程下，细胞可传1-2代。

初次处理

• 从包装中取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身。

• 拆下封口膜，放入37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。

贴壁细胞消化

• 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3分钟；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5mL完全培养基终止消化。

• 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

细胞收货脱落

• 收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5分钟，保留沉淀。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3分钟（或4℃冰箱静置5-7分钟）；消化完向离心管内加入5mL完全培养基终止消化。

• 经1000rpm离心5分钟，丢弃上清，用5mL完全培养基（补加1%FBS，促进贴壁）重悬沉淀，接种于新的培养瓶内。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基（37℃预热）。

细胞实验

• 因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm²）、多聚赖氨酸PLL（0.1mg/mL）、明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

注意事项

• 培养基在4℃条件下可保存3-6个月。

• 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

• 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

• 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通。