小鼠骨髓树突状细胞（Dendritic Cells, DCs）来源于骨髓单核细胞，骨髓是机体的重要造血和免疫器官，位于长骨（如股骨、肱骨）和扁平骨（如髂骨）的骨髓腔内。成熟DCs细胞呈悬浮生长，体积增大，细胞表面延伸出大量树枝状突起，并高表达MHC-II类分子及共刺激分子CD80、CD86，能够有效激活T淋巴细胞，启动适应性免疫应答，在免疫调控和抗原呈递中发挥核心作用。

成熟DCs在免疫应答中的关键作用，广泛应用于抗原呈递机制研究、疫苗开发及肿瘤免疫治疗，尤其在癌症免疫治疗领域，可作为抗原载体诱导特异性抗肿瘤免疫反应，成为个体化肿瘤疫苗研究的重要方向，同时也在自身免疫病、感染性疾病及过敏性疾病的研究中具有重要价值。

小鼠骨髓树突状成熟DC细胞特性特征

• 细胞来源：来源于小鼠骨髓，通过GM-CSF和IL-4等因子诱导成熟。

• 表面标志：高表达主要组织相容性复合物（MHC）类分子，以及CD80、CD86等共刺激分子。

• 抗原呈递能力：能够在MHC I类和II类分子上呈递外源抗原。

• 共刺激分子表达：高表达CD80、CD86等共刺激分子，能够有效激活T细胞。

• MHC分子表达：高表达MHC类分子，能够有效呈递抗原。

• 基因稳定性：原代细胞的基因特征相对稳定，但在长期培养中可能会发生基因漂变。

• 基因编辑：通常不涉及基因编辑，但在特定研究中可能会进行基因改造以增强特定功能。

• 免疫激活能力：能够有效激活T细胞，诱导免疫应答。

• 抗原呈递能力：能够高效地呈递抗原，启动和维持免疫应答。

• 培养条件：通常在含有GM-CSF和IL-4的培养基中培养

小鼠骨髓树突状成熟DC细胞参数表

原代成熟DC细胞（小鼠骨髓树突状细胞）培养教程

DC细胞复苏

• 解冻处理：从液氮罐中取出冻存管，迅速浸入37℃水浴中，轻轻摇晃至完全解冻（约1分钟），避免长时间高温暴露，以减少DC细胞损伤。

• 离心去冻存液：用75%酒精擦拭冻存管表面后，将DC细胞悬液转移至离心管，加入5 mL预热的完全培养基（含GM-CSF、IL-4），1000 rpm离心5分钟，弃去上清以去除DMSO。

• 接种培养：用1-2 mL新鲜培养基轻柔重悬DC细胞，转移至T25培养瓶，补加培养基至8 mL，37℃、5% CO₂培养箱孵育。次日更换新鲜培养基，去除未贴壁的死DC细胞。

DC细胞传代

• 消化准备：当DC细胞密度达80%-90%时，弃去培养基，PBS清洗1次。加入0.25%胰酶-EDTA（含0.53 mM EDTA），37℃孵育1-2分钟，显微镜观察至DC细胞变圆脱落。

• 终止消化：加入等体积完全培养基终止消化，轻柔吹打形成单细胞悬液，1000 rpm离心5分钟，弃去上清后重悬DC细胞。

• 分瓶培养：按1:2至1:6比例分瓶，每瓶补加培养基至8 mL，继续培养。DC细胞主要呈悬浮生长，传代时需保留部分贴壁DC细胞维持群体稳定。

DC细胞冻存

• 冻存液配制：使用无血清冻存液（90%完全培养基 + 10% DMSO）或商业冻存液，以确保DC细胞活性。

• 细胞收集：离心收集DC细胞（1000 rpm，5分钟），弃去上清，用预冷冻存液重悬，调整密度至5×10⁶~1×10⁷ cells/mL。

• 分装与降温：分装至冻存管（1 mL/管），标记信息后，使用程序降温（-1℃/min）至-80℃，24小时后转入液氮长期保存。

关键注意事项

• 培养基要求：DC细胞培养基需含10 ng/mL GM-CSF和IL-4，以维持DC细胞的成熟状态。

• 污染控制：冻存前需检测支原体，复苏后用台盼蓝染色检测DC细胞活力，确保实验稳定性。

• 储存与运输：活DC细胞常温运输，冻存管需干冰运输，长期保存建议使用液氮罐，以确保DC细胞质量。

• 传代次数：原代成熟DC细胞功能受传代次数影响，建议使用10代以内DC细胞进行实验，以保证其生物学特性。