小鼠骨髓树突状细胞（原代细胞未成熟DC细胞）

小鼠骨髓树突状细胞（原代未成熟DC细胞）是从小鼠骨髓组织中分离并诱导分化得到的免疫细胞，广泛用于免疫学研究。

树突状细胞由骨髓单核细胞在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素-4（IL-4）的作用下分化形成，未成熟树突状细胞通常呈半贴壁生长，形成葡萄串状集落，表面具有皱褶和短刺状突起，胞内富含吞噬泡，具备较强的抗原摄取和加工能力。进一步在肿瘤坏死因子α（TNFα）或脂多糖（LPS）刺激下，未成熟树突状细胞可分化为成熟树突状细胞，呈悬浮生长，形态增大，产生大量树枝状突起，并高表达CD80、CD86和MHC-II等共刺激分子，有效激活T细胞，介导免疫应答。

未成熟树突状细胞CD80、CD86、MHC-II等分子表达较低，无法提供T细胞激活所需的第二信号，可能诱导T细胞无能或免疫耐受。

小鼠骨髓树突状细胞广泛应用于免疫耐受研究、肿瘤疫苗开发、药物递送系统和自身免疫疾病模型等领域。在实验过程中需注意细胞培养时间，超过10天后未成熟细胞的成熟率可能超过50%，建议在诱导后7天内使用。

研究表明使用自体腹膜分泌液替代传统细胞因子可降低培养成本，但诱导效率可能下降约30%。小鼠骨髓树突状细胞作为免疫调控的关键细胞类型，是探索免疫耐受、肿瘤免疫治疗和自身免疫疾病机制的重要工具。

小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)特性特征

半贴壁生长模式：初期形成葡萄串样集落，随培养时间延长逐渐脱落
表面超微结构：扫描电镜显示直径15-25 μm，表面布满0.5-2 μm的微绒毛状突起
胞内结构：透射电镜下可见发达的高尔基体及直径0.8-1.2 μm的吞噬囊泡
抗原处理能力：每小时吞噬≥5个1 μm乳胶颗粒；溶酶体酶活性比成熟DC高3倍
迁移特性：趋化因子受体CCR6表达量是成熟DC的5倍；体外迁移速率达8-12 μm/min
免疫调节功能：混合淋巴细胞反应刺激指数＜2.0（成熟DC＞10）；IL-12分泌量＜50 pg/mL（成熟DC＞500 pg/mL）
细胞因子受体：高表达GM-CSFRβ链（CD131）和IL-4Rα
抗原呈递相关：组成性表达CIITA调控的MHC II类基因；低表达TAP1/2抗原处理转运体
耐受相关基因：IDO1（吲哚胺2,3-双加氧酶）表达量是成熟DC的3倍；PD-L1基础表达量达200 MFI
自发成熟倾向：培养超过7天后，CD86表达每日增加8-10%
冻存敏感性：程序性冻存存活率约65%，复苏后吞噬能力下降40%
细胞周期：G0/G1期占比＞85%，增殖能力有限
典型鉴定标准包括：CD11c+CD80lowCD86lowMHC-IIlow表面表型，台盼蓝拒染率＞95%，支原体检测阴性

分子表达特征

分子类型	未成熟状态表达水平	成熟后变化趋势
CD11c（整合素）	≥70%阳性率	维持高表达
MHC II类分子	≤30%阳性率	上调至≥80%
CD80/CD86	≤15%阳性率	上调至≥60%
CD40	基本不表达	显著表达

小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)参数表

细胞名称	原代小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)
英文名称	Mouse Bone Marrow Immature Dendritic Cells;MBDC
细胞来源	C57BL/6小鼠骨髓分离物
细胞类型	未成熟/成熟树突状细胞
细胞形态	半贴壁生长，呈葡萄串样集落或单个不规则形态
纯度标准	支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性
功能特征	吞噬外源抗原并在MHC I/II类分子上呈递
培养基	原代细胞专用培养基
气体环境	95%空气 + 5% CO₂
培养温度	37℃
传代比例	1:2至1:5（贴壁消化法）
传代周期	3天半量换液，1-2周传代
冻存液配方	55%基础培养基+40% FBS+5% DMSO
冻存方式	无血清冻存液，液氮储存
抗原处理能力	每小时吞噬≥5个1 μm乳胶颗粒
迁移特性	趋化因子受体CCR6表达量是成熟DC的5倍，体外迁移速率达8-12 μm/min
免疫调节功能	混合淋巴细胞反应刺激指数＜2.0（成熟DC＞10），IL-12分泌量＜50 pg/mL
细胞因子受体	高表达GM-CSFRβ链（CD131）和IL-4Rα
抗原呈递相关	组成性表达CIITA调控的MHC II类基因，低表达TAP1/2抗原处理转运体
耐受相关基因	IDO1表达量是成熟DC的3倍，PD-L1基础表达量达200 MFI
自发成熟倾向	培养超过7天后，CD86表达每日增加8-10%
冻存敏感性	程序性冻存存活率约65%，复苏后吞噬能力下降40%
细胞代数限制	≤10代
致瘤性	无
生物安全等级	BSL-2
污染检测	HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性
T25瓶竖立培养	传代后静置48小时
细胞因子替代	可使用自体腹膜分泌液替代部分细胞因子，但效率降低约30%
免疫耐受研究	通过抗原递呈诱导T细胞失能
肿瘤疫苗开发	负载肿瘤抗原后用于免疫治疗
药物递送系统	利用其迁移特性靶向淋巴结
自身免疫疾病模型	研究免疫应答调控机制

培养教程

小鼠骨髓树突状细胞(原代细胞未成熟DC细胞)培养教程

细胞复苏

从液氮中取出BMDC细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，直至无冰晶残留。
使用75%酒精消毒管外壁，确保无菌操作。
将BMDC细胞转移至含有5 mL完全培养基的15 mL离心管中。
以1000 rpm离心5分钟，去除DMSO。
弃去上清液后，用1-2 mL完全培养基重悬细胞。
将细胞悬液转移至培养瓶中，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。

细胞传代

待BMDC细胞密度达到80-90%时，进行传代。
弃去培养基，用PBS清洗细胞一次。
加入0.25%胰酶-EDTA溶液（0.53 mM EDTA），37℃消化1-2分钟，直至细胞变圆并脱落。
加入完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞分散。
以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。
用12 mL完全培养基重悬细胞。
按1:2至1:6的比例分瓶，每瓶加入8 mL完全培养基。
将培养瓶置回37℃、5% CO₂培养箱中继续培养。

细胞冻存

当BMDC细胞生长状态良好时，准备进行冻存。
消化、终止反应并离心后，重悬于冻存液中。
细胞密度保持在1×10⁶/mL。
每个冻存管加入1 mL BMDC细胞悬液，并贴好标签。
将冻存管依次置于-20℃ 1.5小时、-80℃过夜。
最终将冻存管转移至液氮中长期保存。

注意事项

避免过度传代，以保持BMDC细胞特性。
推荐在诱导后7天内使用未成熟BMDC细胞进行实验。
使用自体腹膜分泌液替代传统细胞因子可降低成本，但诱导效率可能下降约30%。