小鼠胚肺成纤维细胞（Mouse Embryonic Fibroblasts, MEF）是从小鼠胚胎肺组织中分离得到的一种成纤维细胞，主要来源于C57BL/6小鼠，通常选择出生后2天的小鼠，通过无菌操作将肺组织切割后，使用酶（如胰蛋白酶和胶原酶）消化获得单细胞悬液进行体外培养。MEF细胞呈纺锤形或星形，轮廓清晰，细胞核为卵圆形且核仁明显，细胞质透明，适合贴壁生长。刚分离时，细胞悬浮于培养基中，30分钟内部分贴壁并伸出伪足，6小时后贴壁完全并呈梭形分布；5-7天可达到融合状态，细胞排列紧密，交叉重叠，形成网状结构。MEF细胞是肺间质中数量最多的细胞，能够分泌肺泡壁细胞外基质（如III型胶原、弹性蛋白和蛋白聚糖），在肺部损伤修复、细胞因子分泌、维持血管动态平衡及组织重建中发挥重要作用。小鼠胚肺成纤维细胞广泛应用于生物医学研究，包括基因编辑、干细胞共培养、药物筛选及肺部疾病机制研究等，因其优异的生长和分泌特性，成为研究细胞间相互作用的重要工具。

mef细胞－小鼠胚肺成纤维细胞特性特征

• MEF细胞主要负责合成和分泌细胞外基质成分，如III型胶原蛋白、弹性蛋白及蛋白多糖。

• 在肺部受损或炎症时，MEF细胞会被激活并迁移至损伤部位以促进修复和再生。

• 通过免疫荧光染色可以检测到MEF细胞中常见的标记物，如波形蛋白（Vimentin）和纤维连接蛋白（Fibronectin），这些标记物表明其成纤维细胞的身份。

• MEF细胞的基因组中涉及胶原合成、细胞迁移和增殖的基因表达显著上调，包括：COL1A1 和 COL3A1：编码I型和III型胶原。FAP（成纤维细胞活化蛋白）：与成纤维细胞的活化状态相关。

• 信号通路：MEF细胞在响应炎症或损伤时，通过TGF-β、IL-6等信号通路被激活，这些通路促进了胶原合成及细胞增殖

MEF细胞参数表

原代mef细胞－小鼠胚肺成纤维细胞培养教程

细胞复苏

• 将MEF细胞冻存管从液氮中取出，立即置于37℃水浴中快速解冻（约1-2分钟），轻轻摇动以均匀解冻。

• 解冻后，将细胞悬液转移至含4 mL完全培养基（如DMEM，含10%胎牛血清）的无菌离心管中，轻轻混匀。

• 在1000 rpm离心3-4分钟，弃去上清液。

• 用1-2 mL新鲜培养基重悬MEF细胞，轻轻吹打以确保细胞均匀分散。

• 将细胞悬液接种到培养瓶中（如10 cm培养皿中加入8 mL培养基）。

• 放置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养，让MEF细胞恢复正常状态并贴壁生长。

细胞传代

• 当MEF细胞的汇合度达到80%-90%时，应及时进行传代，以保持细胞的最佳活性。

• 弃去旧培养基，加入无钙、无镁PBS缓冲液轻轻洗涤1-2次，去除残余培养基。

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，确保覆盖MEF细胞单层。

• 将培养瓶置于37℃培养箱内，消化1-2分钟，观察细胞是否变圆并逐渐脱落。

• 轻敲培养瓶，加入适量完全培养基终止消化反应。

• 将细胞悬液转移至离心管，在1000 rpm离心4分钟，弃去上清液。

• 用新鲜培养基重悬MEF细胞，并按1:2或1:3比例分配到新的培养皿或瓶中。

• 加入适量培养基后，将MEF细胞置于培养箱中继续培养。

细胞冻存

• 将生长良好的MEF细胞经胰酶消化后，转移到离心管中，以1000 rpm离心4分钟收集细胞。

• 用冻存液（90%完全培养基 + 10% DMSO）重悬MEF细胞，调整浓度至5×10⁶至1×10⁷/mL。

• 每支冻存管加入1 mL细胞悬液，标明MEF细胞的名称、冻存日期及其他信息。

• 将MEF细胞冻存管置于程序降温盒中，以每分钟1℃的速度降至-80℃。

• 24小时后，将冻存管转移至液氮罐中长期保存。