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产品名称:原代小鼠肺血管平滑肌细胞
产品详细说明

  • 来源:肺组织
  • 细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞样
  • 培养基:原代成纤维细胞专用培养基
  • 其他:在低氧或炎症状态下,小鼠肺血管平滑肌细胞可发生表型转化,从收缩型转变为合成型,表现为收缩型标志物(如α-SMA)表达降低,而合成型标志物(如OPN、VIM)表达升高
小鼠肺血管平滑肌细胞(Mouse Pulmonary Vascular Smooth Muscle cells, mPVSMCs)是研究肺动脉高压及相关疾病的重要模型细胞,主要来源于成熟小鼠(如C57BL/6品系)的肺动脉组织,通过Ⅰ型胶原酶和木瓜蛋白酶酶解技术进行分离。

肺血管平滑肌细胞是肺动脉壁的重要组成成分,形态呈梭形、不规则形或三角形,细胞核居中,具有α-SMA等特征性标志物。原代培养3天后细胞贴壁并逐渐伸展,2周后形成单层或局部多层重叠排列,细胞密度高时可呈旋涡状或栅栏状。

小鼠肺血管平滑肌细胞具有显著的增殖与迁移能力,在肺动脉高压等病理条件下,这些特性会加速疾病的进展。小鼠肺血管平滑肌细胞在疾病机制与治疗靶点开发中具有重要价值。

原代小鼠肺血管平滑肌细胞特性特征

  • 生长模式:在低密度时,细胞常交织成网状;而在高密度时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后,细胞生长迅速,通常在4-6天内即可汇合。

  • 生物标志物:小鼠肺血管平滑肌细胞表面表达α-SMA(α平滑肌肌动蛋白),这是平滑肌细胞的特征性标志物。还可检测到平滑肌肌球蛋白重链、平滑肌22α蛋白等收缩型标志物。

  • 介质表达:小鼠肺血管平滑肌细胞表面表达介质如ICAM-1和VCAM-1,这些分子参与血管壁的炎症反应,并与多种动脉疾病的发生发展密切相关。

  • 基因调控:在病理状态下,例如低氧环境,小鼠肺血管平滑肌细胞可能发生表型转化,从收缩型向合成型转变。这一转变伴随着收缩型标志物(如α-SMA)表达降低,而合成型标志物(如骨桥蛋白OPN、波形蛋白VIM等)表达升高。

  • 增殖与迁移能力:小鼠肺血管平滑肌细胞在病理条件下表现出增强的增殖和迁移能力,这与肺动脉高压等疾病的发展有关

原代小鼠肺血管平滑肌细胞参数表

细胞名称 原代小鼠肺血管平滑肌细胞mPVSMCs
英文名称 Mouse Pulmonary Vascular Smooth Muscle cells
细胞来源 小鼠肺动脉组织
细胞形态 梭形、不规则形、三角形或扇形
核形态 卵圆形,通常居中
细胞直径 7 μm以内
细胞长度 约20-200 μm(具体长度因细胞状态而异)
生物标志物 α-SMA(平滑肌肌动蛋白),ICAM-1,VCAM-1
纯度 ≥90%
培养基 原代细胞专用培养基
培养条件 37℃,5% CO₂
接种密度 1×10⁶ 个细胞/mL
传代时间 当细胞汇合度达到70%-80%时进行传代
胰酶浓度 0.25% 胰酶
冻存液 90% 完全培养基 + 10% DMSO
表达介质 ICAM-1和VCAM-1参与血管壁炎症反应
增殖相关因子 PDGF-BB、PCNA
生理功能 调节肺动脉的收缩与舒张,影响肺血流和气体交换
病理功能 平滑肌增生与肺动脉高压、先天性肺动脉狭窄及肺动脉栓塞相关
成活率 ≥90%
细胞密度 密度低时交织成网状,高密度时排列为旋涡状或栅栏状
培养周期 每3-5天传代一次
增殖速率 通常在接种后3天开始生长
特殊功能 血管重构与炎症反应相关,参与多种动脉疾病的发生发展
注意事项 建议用多聚赖氨酸 PLL(0.1mg/ml)或明胶(0.1%)对接种培养皿包被处理


培养教程

原代小鼠肺血管平滑肌细胞mPVSMCs培养教程

mPVSMCs细胞复苏

  • 培养基预热:将完全培养基置于37℃水浴中充分预热,以准备mPVSMCs细胞的复苏。

  • 细胞解冻:从液氮罐或-80℃冰箱中迅速取出mPVSMCs细胞管,放入37℃水浴中解冻,轻轻摇晃,约1分钟完成解冻。

  • 离心去除冷冻保护剂:将解冻后的mPVSMCs细胞移入15 mL离心管中,加入5 mL预热的完全培养基混匀后,以1000 rpm离心5分钟,弃去上清液。

  • 细胞重悬:用2 mL预热的完全培养基轻轻重悬mPVSMCs细胞沉淀。

  • 接种培养:将重悬后的mPVSMCs细胞移入T25培养瓶中,加入适量完全培养基,置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

  • 贴壁观察:培养24小时后观察mPVSMCs细胞贴壁情况,贴壁良好的细胞为后续培养的主要对象。

mPVSMCs细胞传代

  • 观察细胞状态:当mPVSMCs细胞生长至80%-90%汇合度时,即可进行传代。

  • PBS冲洗:吸弃培养基,用1 mL PBS缓冲液轻轻冲洗培养瓶1次,以去除培养基残留和血清影响。

  • 细胞消化:加入1 mL 0.25%胰酶,均匀覆盖mPVSMCs细胞表面,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞收缩并开始脱落。

  • 终止消化:加入1 mL完全培养基终止胰酶作用,并轻轻拍打培养瓶以促进细胞脱落。

  • 离心重悬:将mPVSMCs细胞悬液转移至离心管中,以1000 rpm离心5分钟,弃去上清液。用适量完全培养基重悬细胞,确保分散均匀。

  • 细胞接种:按1:2或1:3比例将mPVSMCs细胞分装至新的T25培养瓶中,加入适量完全培养基,继续在37℃、5% CO₂条件下培养。

mPVSMCs细胞冻存

  • 收集细胞:待mPVSMCs细胞生长至80%-90%汇合时,按上述传代方法消化并收集细胞沉淀。取少量细胞计数后调整密度至1×10⁶个/mL。

  • 制备冻存液:用预冷的冻存液重悬mPVSMCs细胞沉淀,确保细胞分散均匀。

  • 分装冻存管:将重悬的mPVSMCs细胞溶液分装至冻存管,每管约1 mL。

  • 程序冻存:将冻存管置于程序冻存盒中,先放入-80℃冰箱冷冻过夜,随后转移至液氮罐中长期保存。

注意事项

  • mPVSMCs细胞的解冻与冻存需快速操作,以避免温度波动对细胞活性的影响。

  • 消化时间需严格控制,避免胰酶过度消化导致mPVSMCs细胞损伤。

  • 培养过程中应定期观察mPVSMCs细胞形态,确保细胞状态良好且无污染迹象。

  • 冻存液中的DMSO需质量可靠,并确保在冻存前充分预冷。

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