小鼠牙周膜成纤维细胞（Mouse Periodontal Ligament Fibroblasts, PDLFs）来源于牙根与牙槽骨之间的牙周膜组织。牙周膜是一种致密结缔组织，主要功能是固定牙齿并缓冲咀嚼压力，其内部含有大量胶原纤维束，一端嵌入牙骨质，另一端连接于牙槽骨壁，确保牙齿的稳定性。

PDLFs通常通过酶消化法分离获得，具体步骤包括利用胶原酶和胰蛋白酶对牙周膜组织进行处理，分离出的细胞悬浮于培养基中，经过30分钟贴壁后部分细胞伸出伪足并逐渐铺展为梭形，6小时内完成贴壁并开始均匀生长。细胞在体外表现为纺锤形或星形，胞体较大，核呈椭圆形，核仁明显，细胞质呈弱碱性，显示出较强的蛋白质合成和分泌活性，通常在5-7天内形成融合状态，细胞排列紧密并可能交叉重叠。

PDLFs在牙周组织的维持、修复与再生中发挥重要作用，能够合成和降解胶原蛋白、基质及弹性纤维，同时具备吞噬异物的能力，广泛参与牙周病变的修复过程。目前，这些细胞已被广泛用于体外模型的建立，为研究牙周病的发病机制及治疗策略提供了重要支撑。

小鼠牙周膜成纤维细胞特性特征

• PDLFs细胞呈现成纤维样形态，通常为突起的纺锤形或星形，细胞核规则且呈卵圆形，核仁明显。刚分离时，细胞呈圆形，随后在培养中逐渐贴壁并伸展成梭形。

• PDLFs细胞主要负责胶原蛋白的合成与吸收，参与基质的形成与更新。

• 小鼠牙周膜成纤维细胞具有吸收胶原和吞噬异物的能力，对牙周组织的病变、修复及再生过程发挥重要作用。

• PDLFs细胞在免疫荧光染色中通常表现为阳性标志物，如波形蛋白（Vimentin）和纤维连接蛋白（Fibronectin）。

• 基因表达：PDLFs表达多种与细胞增殖和分化相关的基因，包括胶原合成相关基因（如COL1A1和COL3A1），以及生长因子受体等。

• 这些基因的表达对于维持细胞的功能和促进牙周组织的修复至关重要。细胞质特性：细胞质呈弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，这与其合成胶原和其他基质成分的功能密切相关

小鼠牙周膜成纤维细胞（PDLFs细胞）参数表

原代小鼠牙周膜成纤维细胞（PDLFs细胞）培养教程

pdlfs细胞培养

• 将重悬后的pdlfs细胞以适量培养基稀释后接种至T-25培养瓶，推荐接种密度为2×10³ cells/cm²。

• 加入适量培养基，确保细胞均匀分布，放置于37℃、5% CO₂的培养箱中。

• 初始pdlfs细胞呈圆形，约30分钟开始贴壁，6小时后完成铺展，逐渐呈梭形或星形。

• 每24小时更换一次培养基，以去除悬浮的细胞和代谢废物。

传代操作

• 用PBS洗涤培养瓶以去除残余培养基。

• 加入适量0.25%胰蛋白酶，37℃下孵育2-3分钟，待细胞脱落后用含血清的培养基中和。

• 当pdlfs细胞融合度达到80%-90%时，需进行传代。

• 以300 g离心5分钟后重悬细胞，按1:3~1:5的比例接种至新培养瓶中，以维持pdlfs细胞的增殖活性。

注意事项

• 细胞培养全过程需在生物安全柜中完成，避免污染，尤其是在pdlfs细胞的分离和扩增阶段。

• 严格控制培养箱温度为37℃，CO₂浓度为5%，并定期监测培养基的pH值以保证pdlfs细胞的正常代谢。

• 每日观察pdlfs细胞形态，贴壁细胞应呈梭形或星形分布，细胞核清晰。若发现污染或异常，需及时更换培养基或调整培养条件。

• 所有废弃物及器材需经高压灭菌处理后丢弃，避免生物污染对pdlfs细胞实验环境的影响。