原代小鼠心肌成纤维细胞（Mouse Cardiac Fibroblasts, MCFs）是心脏非心肌细胞的主要构成部分，约占心脏细胞总数的60%-70%，主要来源于健康小鼠的心脏组织，尤其是心室区域。

小鼠心肌成纤维细胞通过无菌条件下的组织消化和差速贴壁法，可分离获得高纯度的成纤维细胞。刚分离的细胞多呈圆形，悬浮于培养基中，贴壁后逐渐伸展为纺锤形或星形。它们形态规则，核呈卵圆形，核仁清晰，细胞质弱碱性，增殖能力强，在体外培养中5-7天即可达融合状态，并形成交叉重叠的网状结构。小鼠心肌成纤维细胞广泛应用于心血管疾病的研究，尤其是在探索心脏纤维化机制、心肌损伤修复和药物筛选等方面，是研究心脏病理生理的重要模型和实验工具。

mcfs小鼠心肌成纤维细胞特性特征

• 结构支持：小鼠心肌成纤维细胞为心肌细胞提供结构支持，并形成细胞外基质，促进心脏的正常功能。

• 修复与再生：在心脏损伤时，小鼠心肌成纤维细胞能够产生旁分泌生长因子，促进心肌细胞的修复和再生。

• 转化能力：在病理状态下（如心脏压力负荷），小鼠心肌成纤维细胞可以转化为肌成纤维细胞，参与心脏的纤维化过程。

• 标志物表达：Vimentin、Collagen I、α-SMA（平滑肌α-肌动蛋白）。

• 生长因子相关基因：如TGF-β、FGF等，这些基因在心脏损伤和修复过程中发挥重要作用。

• 胶原合成相关基因：如COL1A1和COL3A1，这些基因编码合成胶原蛋白所需的蛋白质。

• TGF-β信号通路：在心肌成纤维细胞的增殖、迁移及转化过程中起关键作用，与心脏纤维化密切相关。

• Wnt/β-catenin信号通路：调控成纤维细胞的增殖和分化，在心脏压力负荷下显著上调

mcfs细胞参数表

原代小鼠心肌成纤维细胞mcfs细胞培养教程

 细胞培养接种

• 将MCFs细胞悬液铺板于10cm无菌培养皿中，放置于37°C、5% CO₂培养箱中静置培养。

• 培养90分钟后，用移液器轻轻吹打，促进未贴壁细胞脱离，并优化MCFs细胞的贴壁生长。

• 更换培养基：初次培养24小时后更换培养基，以去除未附着的细胞和碎片。之后每2-3天更换一次培养基，确保MCFs细胞健康生长。

传代培养

• 传代条件：当MCFs细胞密度达到80%-90%融合时，进行传代操作。

• 用PBS洗涤细胞两次后，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，消化约45-60秒，观察MCFs细胞开始收缩后终止消化。

• 加入新鲜培养基，轻轻吹打使细胞脱落并均匀分散。

• 离心重悬：用1000rpm离心3分钟，弃去上清液后以培养基重悬MCFs细胞，按比例接种于新的培养皿中。

冻存与复苏

• 冻存：将MCFs细胞悬液与90%培养基和10%DMSO混合，逐步降温至-80°C后转入液氮中长期保存。

• 复苏：将冻存的MCFs细胞快速解冻于37°C水浴中，离心去除DMSO后，按上述方法接种培养。

注意事项

• 操作需在无菌环境下进行，避免MCFs细胞污染。

• 定期观察MCFs细胞生长状态，及时更换培养基以维持活性。

• 建议传代次数控制在5代以内，以保证实验中MCFs细胞的稳定性和生物学特性。