小鼠肺成纤维细胞（Mouse Lung Fibroblasts）来源于健康小鼠的肺组织，肺是位于胸腔内的重要呼吸器官，共有五个肺叶（左二右三）。小鼠原代肺成纤维细胞由胚胎间充质细胞分化而来，是肺间质的主要组成部分，在维持肺的正常结构和功能中起关键作用。

形态上，成纤维细胞呈纺锤形或星形的扁平结构，核椭圆形，核仁明显，细胞质透明。小鼠原代肺成纤维细胞主要功能包括分泌细胞外基质（如III型胶原和弹性蛋白），维持肺泡和间质的形态，及在肺损伤后通过增殖和迁移促进修复；在病理状态下，这些细胞会被激活，过度分泌胶原蛋白及其他基质组分，导致纤维化等异常。

实验中，常选用C57BL/6或BALB/c等小鼠品系，通过肺组织的心脏灌注清洗、剪碎酶解、离心过滤等步骤分离并纯化细胞。小鼠肺成纤维细胞是研究肺纤维化、炎症、肿瘤及其他肺部疾病的重要模型，广泛应用于病理机制探讨、药物筛选、基质生物学和组织工程研究中，为肺部相关生物学研究提供了基础支持。

小鼠肺成纤维细胞特性特征

• 功能特征：主要负责合成和分泌细胞外基质成分，如III型胶原、弹性蛋白和蛋白多糖。在肺部受损或炎症时，成纤维细胞会被激活并增殖，迁移至损伤部位以促进修复和再生。

• 小鼠肺成纤维细胞通常通过免疫荧光染色检测出以下标记物：波形蛋白（Vimentin）、纤维连接蛋白（Fibronectin）。

• 基因表达：成纤维细胞的基因组中，涉及胶原合成、细胞迁移和增殖的基因表达显著上调。这些基因包括：COL1A1、COL3A1：编码I型和III型胶原。

• FAP（成纤维细胞活化蛋白）：与成纤维细胞的活化状态相关。

• 信号通路：小鼠肺成纤维细胞在响应炎症或损伤时，常通过TGF-β、IL-6等信号通路被激活，这些通路促进了胶原合成及细胞增殖。

小鼠原代肺成纤维细胞参数表

小鼠原代肺成纤维细胞培养教程

细胞复苏

• 在无菌环境下进行操作，例如使用生物安全柜。

• 准备培养基（如DMEM，含10%胎牛血清）和复苏所需器材。

• 将存储在液氮中的小鼠原代肺成纤维细胞冻存管取出，立即置于37℃水浴中快速解冻。

• 解冻后，将细胞悬液转移至含4 mL培养基的无菌离心管中，混匀。

• 在1000 rpm离心3分钟后，弃去上清液，加入新鲜培养基1-2 mL轻轻吹打重悬细胞。

• 将细胞悬液转移至培养瓶中，加入适量培养基（如10 cm培养皿加8 mL培养基）。

• 在37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜，让小鼠原代肺成纤维细胞适应新的培养环境。

细胞传代

• 检查小鼠原代肺成纤维细胞的生长情况，当细胞达到80%-90%汇合时，进行传代操作。

• 弃去培养基，用无钙、无镁PBS缓冲液轻轻冲洗1-2次，以去除残余培养液。

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，确保覆盖所有细胞。

• 将培养瓶置于37℃培养箱内消化1分钟，观察细胞形态是否变圆并脱落。

• 轻敲培养瓶，加入培养基终止消化液的作用。

• 将细胞悬液转入离心管，在1000 rpm离心4分钟，弃去上清液，加入新鲜培养基重悬细胞。

• 按1:2或1:3的比例稀释小鼠原代肺成纤维细胞，分配至新培养皿或培养瓶中，加入适量培养基继续培养。

细胞冻存

• 生长良好的小鼠原代肺成纤维细胞经胰酶消化后，转入离心管中，以1000 rpm离心4分钟。

• 用无血清冻存液重悬细胞，调整浓度至5×10⁶至1×10⁷/mL。

• 每支冻存管加入1 mL细胞悬液，并标明小鼠原代肺成纤维细胞的具体信息。

• 将冻存管置于程序降温盒中，缓慢降温至-80℃，24小时后转移至液氮罐长期保存。