小鼠肾小管上皮细胞分离自肾组织；肾小管上皮细胞的主要功能包括重吸收原尿中几乎全部的葡萄糖和氨基酸，排泌非营养物质进入终尿，分泌炎症介质如细胞因子和趋化因子，通过产生IL-8或直接趋化白细胞参与急性炎症反应。此外，在移植肾炎症和新月体肾炎中，肾小管上皮细胞表达IL-2R和MHC-II类抗原，参与肾免疫损伤的发生。

目前，许多学者认为马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephropathy, AAN）引发的肾间质纤维化病变的主要机制可能是肾小管上皮细胞转分化异常所致。体外培养mRTECs多用于肾间质纤维化研究和相关治疗药物筛选，获得的稳定mRTECs细胞株大多经过基因转染技术处理，其结构和功能与体内正常mRTECs存在根本差别。相比之下，原代细胞培养具有更接近体内细胞状况的优势，基本没有一种细胞系能够保持原代细胞的基本特征。然而，RTECs的获得往往较为困难且价格昂贵，对条件要求也非常苛刻。

肾小管上皮细胞特性

• 肾小管上皮细胞具有重要功能，包括重吸收葡萄糖和氨基酸、排泌非营养物质、分泌炎症介质以及参与免疫损伤反应。

• 对肾间质纤维化机制的研究日益重视，肾小管上皮细胞在其中的作用被人们重视。

• 马兜铃酸肾病引发的肾间质纤维化可能与肾小管上皮细胞转分化异常有关。

• 建立肾小管上皮细胞模型对研究肾间质疾病的发病机制和治疗药物具有重要意义。

• 原代细胞培养具有细胞性质更接近体内细胞状况的优势，建立需要高效的原代细胞培养技术。

肾小管上皮细胞参数表

小鼠肾小管上皮细胞培养

准备工作

• 将小鼠肾小管上皮细胞(T25细胞培养瓶)取出并放置在无菌操作台上。

• 使用75%酒精对T25细胞培养瓶的瓶身进行消毒。

• 拆下瓶口的封口膜。

细胞培养准备

• 将消毒后的T25细胞培养瓶放入37℃、5% CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。

细胞消化及传代

• 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 添加1mL 0.25%胰蛋白酶消化液至T25培养瓶中，轻轻转动使消化液覆盖整个培养瓶底，然后吸出多余的胰蛋白酶消化液，将培养瓶放入37℃温水浴中，进行消化1-3分钟，观察细胞回缩变圆后加入5mL完全培养基终止消化。

• 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25细胞培养瓶，然后补充新鲜的完全培养基至5mL。

• 将T25细胞培养瓶置于37℃、5% CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中进行静置培养。

细胞实验准备

• 若需将细胞转移至其他实验器皿，需对实验器皿进行包被，增强细胞贴壁性，避免影响实验结果。

注意事项

• 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

• 在细胞培养过程中，需保持无菌操作。

• 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，以免影响细胞贴壁及生长状态。