小鼠肝内胆管上皮细胞分离自肝脏组织。肝内胆管上皮细胞约占据肝细胞总数的5%，形成复杂的网状管形结构，通过调控激素的分泌和吸收，以维持胆小管的结构，并参与免疫应答。肝内胆管上皮细胞在肝脏的代谢、排泌和免疫过程中扮演着关键角色，对于肝脏疾病的发展起着重要作用。

小鼠肝内胆管上皮细胞特性

• 肝内胆管上皮细胞约占肝细胞总数的5%，形成复杂的网状管形结构。

• 肝内胆管上皮细胞调控激素分泌和吸收，保持胆小管结构，参与免疫应答。

• 肝内胆管上皮细胞在肝脏代谢、排泌和免疫过程中起重要作用，对肝脏疾病发展具关键性。

• 研究表明，原发性硬化性胆管炎和胆管癌等疾病均以肝内胆管上皮细胞为病变靶位，引发肝内胆管损伤。

小鼠肝内胆管上皮细胞参数表

小鼠肝内胆管上皮细胞培养教程

细胞传代步骤

• 细胞密度达80%-90%时进行传代。

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

• 加2ml消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

• 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

• 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

细胞复苏步骤

• 解冻细胞悬液。

• 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。

• 在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。

• 将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。

• 第二天换液并检查细胞密度。

细胞冻存步骤

• 细胞生长状态良好时进行冻存。

• 弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

• 在1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。

• 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80℃冰箱，至少2小时后转入液氮罐储存。记录冻存管位置以便下次取用。