小鼠表皮角化细胞分离自小鼠皮肤组织。表皮角化细胞是表皮的主要细胞成分，表皮角化细胞在体内不断增殖。分裂的角化细胞主要分布在基底层，少数位于棘细胞层。随着细胞向表层推移，其分化程度逐渐增加，同时丧失分裂活性。

小鼠表皮角化上皮细胞是先通过中性蛋白酶消化，然后采用胰蛋白酶和胶原酶的混合消化法。

小鼠表皮角化上皮细胞特性

• 表皮位于动物皮肤的外层、由胚胎时期外胚层形成、具有抗摩擦和抗损伤的作用

• 表皮角化细胞(KC)是构成表皮的主要细胞成分

• 表皮角化细胞在体内处于不断增殖过程中、分裂的角化细胞主要位于基底层，少数位于棘细胞层

• 随着向表层的推移，细胞的分化程度逐渐增加，并丧失分裂活性

小鼠表皮角化上皮细胞参数表

小鼠表皮角化上皮细胞培养

贴壁细胞消化

• 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液1ml至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3分钟。倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化。

• 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5ml，置于37℃、5% CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

细胞实验

• 由于原代细胞贴壁的特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因未贴好影响实验。包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm²）、多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml）、明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

注意事项

• 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

• 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

• 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。