原代小鼠肾小球内皮细胞是从小鼠肾组织中分离得到的。
肾小球是肾脏的功能单位，起着过滤血液、生成原尿的关键作用。内皮细胞作为肾小球滤过膜的一部分，位于肾小球毛细血管壁腔侧，与血流直接接触，具有重要的保护作用，可阻止大分子物质通过，并具有抗凝、抗血栓的功能。

小鼠肾小球内皮细胞相关特性

• 肾小球是肾脏的功能单位，用于过滤血液生成原尿。其过滤膜包括内层、中层和外层，内层为内皮细胞层。

• 小鼠肾小球内皮细胞是特殊微血管类型的细胞，位于肾小球毛细血管壁腔侧，是肾小球滤过膜的第一道屏障，具有抗凝、抗血栓作用。

• 肾小球系膜是肾小球毛细血管袢之间的特殊间充质，由系膜细胞和系膜基质组成。系膜细胞具有活跃的功能，包括分泌细胞基质、产生细胞因子、吞噬和清除大分子物质等。

小鼠肾小球内皮细胞参数表

小鼠肾小球内皮细胞培养操作步骤

细胞培养环境准备

• 使用75%酒精消毒T25细胞培养瓶外表面，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4小时，稳定细胞状态。

贴壁细胞消化

• 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 添加1mL 0.25%胰蛋白酶消化液至T25培养瓶中，轻轻转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3分钟。

• 倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5mL完全培养基终止消化。

• 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

细胞收货脱落

• 收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5分钟，保留沉淀。

• 添加0.5mL 0.25%胰蛋白酶消化液至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3分钟。

• 消化完毕后向离心管内加入5mL完全培养基终止消化。

• 经1000rpm，离心5分钟，丢弃上清，用5mL完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。

细胞实验

• 若将贴壁的原代细胞转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等），需要对实验器皿进行包被以增强细胞贴壁性。包被条件可选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）、PLL（0.1mg/ml）、明胶（0.1%）。

注意事项

• 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

• 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

• 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。