小鼠视网膜微血管内皮细胞（Mouse Retinal Microvascular Endothelial Cells）是从小鼠的视网膜组织中分离出的内皮细胞。小鼠视网膜微血管内皮细胞在密度梯度离心法下制备而来，具有较高的纯度（约90%以上）和特定标识物（如vWF、Factor VIII的阳性表达）。

视网膜微血管内皮细胞特性

• 视网膜是眼球壁内层的一层透明薄膜，含有丰富的血管和色素细胞。

• 视网膜血管分为大血管层、中血管层和毛细血管层，血管内皮细胞具有多种生理功能，包括血管调节、凝血、免疫等。

• 小鼠视网膜微血管内皮细胞采用密度梯度离心法制备，具有高纯度和特定标识物的阳性表达。

• 小鼠视网膜微血管内皮细胞来源于成年小鼠视网膜组织，具有调节血管张力、血压以及抗血栓形成等重要功能。

小鼠视网膜微血管内皮细胞参数表

小鼠视网膜微血管内皮细胞培养

取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。

贴壁细胞消化

• 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3分钟。倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5mL完全培养基终止消化。

• 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5% CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

细胞收货脱落

• 收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5分钟，保留沉淀。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3分钟（或4℃冰箱静置5-7分钟）。消化完向离心管内加入5mL完全培养基终止消化。

• 经1000rpm，离心5分钟，丢弃上清，用5mL完全培养基（补加1% FBS，促进贴壁）重悬沉淀，接种于新的培养瓶内。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基（37℃预热）。

细胞实验

• 因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验。

• 包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2），多聚赖氨酸PLL（0.1mg/mL），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。

• 悬浮/半悬浮细胞无需包被。