大鼠脊髓神经元细胞源自中枢神经系统的延伸部分，即脊髓组织。

大鼠脊髓神经元细胞具有高度的分化程度，无法进行分裂增殖，在培养过程中要求较高。神经干细胞作为一种特殊类型的细胞，具有自我维持和多种分化潜能，对损伤和疾病有较强的反应能力，是神经系统损伤修复和再生研究的热点。

大鼠脊髓神经元细胞特性

• 大鼠脊髓神经元细胞分离自脊髓组织，是源自脑的中枢神经系统延伸部分。

• 脊髓主要功能是传送脑与外周之间的神经信息，是许多简单反射的中枢。

• 脊髓的结构包括灰质区和白质区，其中灰质区主要由神经细胞构成。

• 脊髓神经元细胞是高度分化的终末细胞，不能分裂增殖，培养要求高。

• 神经干细胞具有自我维持和多种分化潜能，对损伤和疾病具有反应能力，是神经系统损伤修复和再生研究的热点。

• 大鼠原代脊髓神经元细胞是用于神经科学研究和药物筛选的重要工具。

大鼠脊髓神经元细胞参数表

大鼠脊髓神经元细胞分离及培养操作步骤

1. 培养皿的包被

• 将盖玻片裁成 0.5cm×0.5cm 大小，洗洁精浸洗、烘干。

• 经 5%盐酸浸泡30min，自来水冲洗20min，三蒸水冲洗，浸泡过夜并烘干；移入 95%酒精浸泡保存。用前酒精灯烤干，放入 24 孔细胞培养板。

• 用 0.01%的 L-多聚赖氨酸溶液包被培养皿和小玻片，37℃恒温孵育 4h 或常温过夜。吸弃 L-多聚赖氨酸溶液，灭菌去离子水漂洗培养孔及小玻片，晾干备用。

2. 大鼠脊髓神经元细胞的分离及培养

• 用 75%酒精消毒新鲜 24h 内的健康 SD 大鼠，在无菌条件下断头，分离并切取脊髓，置于盛冷的pH7.2、无钙、镁的D-Hank's液的平皿中（下置冰袋）。

• 无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。

• 用虹膜剪将组织剪切成 1mm3左右的组织块，用 0.125%胰蛋白酶消化，37℃作用 10min，期间振摇 2~3次。

• 巴斯德吸管轻轻吹打 20次，静置 5min，将细胞上清移入新的无菌离心管，加入完全接种液终止消化。剩余组织按照上述步骤继续消化，重复2-3次，制成细胞悬液。

• 将新的离心管中细胞悬液，离心（1000r/min，10 min，4℃），弃去上清液。加入完全培养液重悬，200 目不锈钢网过滤。

• 将滤液进行台盼蓝拒染试验，血细胞计数板镜下计数。以 8.0 × 104 至 1.0 × 105/mL 的密度将细胞以 400µl/孔接种到预先用 L-多聚赖氨酸包被的 24 孔培养板。

• 置于 37℃、5% CO2 培养箱培养 4～6h，全量更换为无血清培养液。

• 体外培养第 3天，加入 Ara-C 工作液，以抑制非神经细胞过度增殖，作用 24 h 后吸出。

• 此后每 3d 半量换液1次，体外培养第 7～21天的细胞用于实验。

无菌操作注意事项

• 细胞培养过程中保持操作区域的无菌清洁，包括使用紫外线和臭氧消毒设备、更换专用拖鞋、穿戴一次性橡胶手套、实验服、口罩和帽子等。