大鼠肺动脉成纤维细胞（Rat Pulmonary Artery Fibroblasts, RPAFs）是从大鼠肺动脉外膜组织中分离并培养的细胞，主要呈长梭形或星形，贴壁生长，细胞核为卵圆形，核仁明显，细胞质透明且呈弱碱性，初次分离时悬浮于培养基中，贴壁后逐渐伸展成梭形并分布均匀，融合后形成网状结构。

肺动脉成纤维细胞是肺间质中数量最多的细胞类型，主要功能包括合成和分泌细胞外基质（如胶原蛋白和弹性蛋白）、维持肺动脉结构的完整性及在组织损伤时参与修复过程。在培养条件下，细胞生长迅速，5-7天可达到融合状态，具有显著的蛋白质合成与分泌能力。大鼠肺动脉成纤维细胞在研究肺动脉结构和功能、组织修复以及肺动脉相关疾病的分子机制方面具有重要的应用价值。

大鼠肺动脉成纤维细胞特性特征

• 标志物表达：成纤维细胞表达波形蛋白（Vimentin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），后者在转化为肌成纤维细胞时显著增加。

• 细胞外基质合成：主要合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白等细胞外基质成分，对维持肺动脉的结构和功能至关重要。

• 成纤维细胞的基因表达谱显示其具备较强的增殖能力和修复能力，相关基因包括：胶原蛋白基因：如COL1A1、COL3A1等。生长因子受体：如TGF-β受体，与组织修复和纤维化过程相关

大鼠肺动脉成纤维细胞参数表

原代大鼠肺动脉成纤维细胞培养教程

细胞复苏

• 解冻细胞：将冻存管迅速放入37℃的水浴中，并轻轻摇晃，使肺动脉成纤维细胞在1-2分钟内完全解冻。

• 稀释培养：将解冻后的细胞立即加入4 mL含有10%胎牛血清的低糖DMEM培养基中，轻轻混匀。

• 离心去杂：将混合液转移至15 mL离心管中，以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液，保留细胞沉淀。

• 重悬与培养：用1-2 mL新鲜培养基重悬肺动脉成纤维细胞，并转移至培养瓶中（如T25瓶）。加入适量培养基（约5 mL），置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养。

• 换液操作：次日观察细胞贴壁状态，弃去旧培养基，更换新鲜培养基。

细胞传代

• 传代时机判断：当肺动脉成纤维细胞生长达到80%-90%融合时，可进行传代操作。

• 洗涤细胞：弃去培养液，用PBS溶液轻轻洗涤细胞一次，去除残余培养基。

• 细胞消化：加入1.5 mL 0.125%胰酶溶液，37℃孵育1-3分钟，待肺动脉成纤维细胞开始变圆、轻微脱落时，立即终止消化。

• 终止消化与收集：加入适量含10%胎牛血清的培养基终止消化，并轻轻吹打使细胞完全脱落。

• 离心与重悬：将细胞悬液转入离心管，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清液后，用新鲜培养基重悬细胞。

• 接种与培养：按1:2或1:3比例接种肺动脉成纤维细胞至新培养瓶中，加入适量培养基，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

细胞冻存

• 细胞收集：按上述传代步骤消化并收集肺动脉成纤维细胞，离心去除培养基。

• 制备冻存液：用含10% DMSO和90%胎牛血清的冻存液重悬细胞，使浓度保持在1×10⁶至5×10⁶个细胞/mL。

• 冻存分装：将肺动脉成纤维细胞悬液分装至冻存管中，每管500 μL至1 mL。

• 缓慢冷冻：将冻存管放入程序降温盒中，置于-80℃冰箱中过夜，确保肺动脉成纤维细胞的冷冻过程缓慢且均匀。

• 长期保存：次日将冻存管转移至液氮储存罐中，进行长期保存。

注意事项

• 细胞状态监测：确保肺动脉成纤维细胞始终保持良好的贴壁状态，避免过度消化或过密培养。

• 无菌操作：复苏、传代和冻存过程中需严格遵循无菌操作规范，防止细胞污染。

• 培养基更换：定期更换培养基，通常每2-3天换液一次，以确保肺动脉成纤维细胞处于最佳生长状态。