大鼠睾丸支持细胞来源正常的大鼠睾丸组织；大鼠睾丸支持细胞是雄性睾丸间质中的关键细胞，其主要职责包括合成和分泌睾丸酮，及支持精子的发生、成熟和性功能的维持。

大鼠睾丸支持细胞形态特征独特，呈现出圆形、椭圆形或不规则形的胞体，核位于中央，胞质呈嗜酸性，含有1-2个核仁和管嵴状线粒体，没有分泌颗粒。

大鼠睾丸支持细胞纯度高于90%，不含有多种病原体。

大鼠睾丸支持细胞参数表

大鼠睾丸支持细胞复苏

• 将含有1mL细胞悬液的冻存管置于37℃水浴中迅速摇晃解冻。

• 加入4mL培养基混合均匀。

• 在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液。

• 补加1-2mL培养基后吹匀。

• 将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜。

大鼠睾丸支持细胞传代

• 当细胞密度达80%-90%时进行传代培养。

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

• 加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。

• 观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，立即加入少量培养基终止消化。

• 补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

• 将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

大鼠睾丸支持细胞冻存

• 待细胞生长状态良好时，进行细胞冻存。

• 弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化。

• 4 min 1000rpm离心去掉上清。

• 加入1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml。

• 每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

• 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌存。