大鼠呼吸道上皮细胞培养步骤
1. 培养器具和试剂准备:无菌培养箱、离心管、移液器、吸头、细胞培养瓶(T25瓶)、吸管等、细胞培养基
2. 培养基预热:将培养基置于37℃恒温培养箱中预热。
3. 细胞解冻:取出冻存的细胞培养瓶,迅速放入37℃水浴中,轻轻摇晃至细胞完全解冻。
4. 细胞传代:将解冻后的细胞转入新的细胞培养瓶中,根据需要调整细胞密度和培养基体积。
5. 细胞培养:将细胞培养瓶放入37℃恒温培养箱中,确保培养基中空气95%,CO2 5%的气相。每2-3天进行一次培养基更换。
6. 细胞传代:当细胞密度达到80-90%时,使用0.25%胰蛋白酶对细胞进行消化,并将细胞传代至新的细胞培养瓶中。
7. 细胞包被:在需要时,使用鼠尾胶原Ⅰ进行细胞包被处理,以促进细胞的贴壁和生长。
8. 培养记录:记录细胞培养的过程和细胞状态变化,包括细胞密度、形态、健康状况等。