原代大鼠视网膜微血管内皮细胞

大鼠视网膜微血管内皮细胞来源于成年大鼠视网膜组织，经过分离培养获得，具有高纯度，不含有多种病原体。视网膜是由血管腔面单层扁平上皮样细胞组成，其产生的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等具有重要作用。

视网膜及微血管内皮细胞特性

产品名称	大鼠视网膜微血管内皮细胞（Rat Retinal Microvascular Endothelial Cells）
组织来源	大鼠视网膜组织
细胞类型	内皮细胞（Endothelial Cells）
细胞系统	眼细胞系统（Ocular Cell System）
细胞形态	上皮细胞样（鹅卵石样，不规则细胞）
生长特性	贴壁生长
传代特性	可传2-3代
传代比例	1:02
培养基类型	血管内皮细胞专用培养基
添加因子	FBS、Heparin、Endothelial Cell Growth Supplement、 Selenium、Transferrin、Insulin、Glutamine、Penicillin、Streptomycin
包被条件	PLL（0.1 mg/ml）、明胶（0.1%）
培养条件	95%空气 + 5% CO2，37℃
换液频率	每2-3天换液一次
消化液	0.25% 胰蛋白酶
细胞鉴定	血小板-内皮细胞粘附分子（PECAM-1/CD31）或血管假性血友病因子（vWF）免疫荧光染色为阳性
细胞纯度	纯度高于90%
微生物检测	不含有支原体、细菌、酵母和真菌等污染
病毒检测	不含有HIV-1、HBV、HCV等病毒
培养方法	胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法，通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备
细胞应用	研究视网膜血管性疾病的病理生理机制、疾病的早期防治，糖尿病性视网膜病变、年龄相关性黄斑变性等视网膜疾病的研究

吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶以覆盖整个瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3分钟。显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5mL完全培养基终止消化。
用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。
待细胞完全贴壁后，培养观察，之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

收集所有细胞悬液，1000rpm离心5分钟，保留沉淀。
添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3分钟（或4℃冰箱静置5-7分钟）。消化完后向离心管内加入5mL完全培养基终止消化。
经1000rpm离心5分钟，丢弃上清，用5mL完全培养基（补加1%FBS，促进贴壁）重悬沉淀，接种于新的培养瓶内。
待细胞完全贴壁后，培养观察，之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基（37℃预热）。

原代细胞贴壁特殊，消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免因贴壁不良影响实验。包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm²）、多聚赖氨酸PLL（0.1mg/mL）、明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。