大鼠脐静脉血管内皮细胞培养
细胞分离试剂盒
该试剂盒用于温和且有效地分离培养中附着的人类原代细胞,同时适用于动物原代细胞和细胞系。其组成成分包括:HepesBSS (30 mM Hepes)、胰蛋白酶/EDTA溶液(0.04 % / 0.03 %)、胰蛋白酶中和溶液(TNS)。
细胞传代步骤
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当细胞密度达80%-90%时即可进行传代。
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弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
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加2ml消化液(0.25% Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞消化情况。
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细胞大部分变圆并脱落后,迅速拿回操作台,轻敲培养瓶后加少量培养基终止消化。
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按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻混匀后吸出,在1000RPM离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
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将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
细胞复苏步骤
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将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻。
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加入4mL培养基混合均匀,在1000RPM离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。
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将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜,第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存步骤
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细胞生长状态良好时进行细胞冻存。
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弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后加入2ml完全培养基终止消化,计数。
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1000RPM离心5分钟去掉上清,用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%,迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,做好标识。
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将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2小时后转入液氮罐储存。
运输和保存
冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输。收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃条件下保存1个月。