大鼠真皮微血管内皮细胞分离自真皮组织。微血管内皮细胞(MEC)在炎症反应、肿瘤生长和创面愈合过程中起着非常重要的作用。真皮微血管内皮细胞，由于其体外分离培养技术困难，相关研究受到了一定限制。

大鼠真皮微血管内皮细胞特性

• 大鼠真皮微血管内皮细胞分离自真皮组织。

• 真皮位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结构包括胶原蛋白、弹性纤维以及基质。

• 真皮由乳头层与网状层组成。

• 微血管内皮细胞在炎症反应、肿瘤生长、创面愈合等过程中有重要作用。

• 创面愈合研究中，真皮微血管内皮细胞的体外分离培养技术困难，限制了相关研究。

原代大鼠真皮微血管内皮细胞参数表

大鼠真皮微血管内皮细胞培养

• 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。

贴壁细胞消化

• 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 添加1mL 0.25%胰蛋白酶消化液至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶使消化液覆盖整个瓶底，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3分钟。待细胞回缩变圆后，加入5mL完全培养基终止消化。

• 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5% CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察，并按换液频率更换新鲜培养基。

细胞收货脱落

• 收集所有细胞悬液，1000rpm离心5分钟，保留沉淀。

• 添加0.5mL 0.25%胰蛋白酶消化液至离心管中，重悬沉淀，37℃消化3分钟（或4℃冰箱静置5-7分钟），然后加入5mL完全培养基终止消化。

• 1000rpm离心5分钟，丢弃上清，用5mL完全培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察，按换液频率更换新鲜培养基。

细胞实验

对于贴壁的原代细胞，在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验。包被条件常选用鼠尾胶原I（2-5μg/cm²）、多聚赖氨酸（PLL，0.1mg/mL）、明胶（0.1%）等。