人真皮微血管内皮细胞（Human Dermal Microvascular Endothelial Cells，HDMEC）是从人类皮肤真皮组织中分离得到的原代细胞，常用于研究微血管生物学、血管生成机制及相关疾病。真皮微血管内皮细胞主要来源于青少年包皮或成人皮肤的手术切除组织，分布于真皮层的微血管和淋巴管中，具有共同的胚胎起源，并可通过多种特异性标记物鉴定。真皮位于表皮下方，与皮下组织相连，由胶原纤维、弹性纤维和基质构成，其复杂的纤维网络赋予皮肤弹性与韧性，同时包含丰富的微血管系统。

在体外培养环境中，HDMEC细胞表现出与体内状态相似的生理功能，能够模拟正常内皮细胞的生物学特性，广泛应用于肿瘤血管生成、炎症反应、创面愈合等领域的研究。与表皮细胞和真皮成纤维细胞相比，HDMEC细胞的分离与培养技术相对复杂，但在揭示微血管功能及相关疾病机制方面具有重要价值。

HDMEC细胞（人真皮微血管内皮细胞）特性特征

• 标记物表达：HDMEC细胞表达多种内皮细胞特异性标记物，如vWF（血管内皮生长因子）、CD31（P-CAM）等。

• 功能相关分子：HDMEC细胞能够合成和分泌前列环素、一氧化氮、内皮源性超极化因子及内皮素等物质，这些分子在维持血管正常功能中起着重要作用。

• 基因表达：HDMEC细胞在体外培养中表现出与体内状态相似的基因表达谱，参与炎症反应、血管生成及创面愈合等生理过程。研究表明，HDMEC细胞通过调控增殖、凋亡和老化等信号通路来维持微血管的动态平衡

原代HDMEC细胞参数表

原代HDMEC细胞（人真皮微血管内皮细胞）培养教程

细胞复苏

• 将HDMEC细胞冻存管从液氮中取出，迅速放入37℃水浴中解冻，轻轻摇晃确保均匀受热。解冻时间应控制在1-2分钟内，以避免细胞长时间暴露于高温。

• 解冻后的HDMEC细胞悬液（约1 mL）迅速转移至含有4 mL预热的完全培养基的离心管中，混合均匀后在1000 RPM离心4分钟，弃去上清液。

• 用1-2 mL新鲜完全培养基重悬HDMEC细胞，轻轻吹打以分散细胞团块。将细胞悬液转移至培养瓶或培养皿中，添加适量完全培养基（10 cm培养皿中约8 mL），置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养。

• 第二天检查HDMEC细胞的贴壁状态和形态，弃去培养基并更换新鲜培养基，之后每2-3天更换一次培养基。

细胞传代

• 当HDMEC细胞覆盖培养瓶底面积的80%-90%时即可进行传代。过密培养可能导致细胞增殖能力下降。

• 弃去培养基后，用无钙镁的PBS缓冲液轻轻冲洗细胞1-2次。加入1 mL胰酶-EDTA消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，期间密切观察。

• 当HDMEC细胞多数变圆并脱落时，迅速加入完全培养基中和胰酶，轻轻吹打使细胞完全脱离瓶壁。

• 在1000 RPM下离心4分钟，弃去上清液后用新鲜培养基重悬细胞。以适当密度（1:2或1:3）分瓶培养，补充完全培养基至8-10 mL。

• 在传代过程中应保持操作轻柔，避免细胞过度损伤，以维持HDMEC细胞的活力和功能。

细胞冻存

• 冻存液由90%完全培养基与10%DMSO组成，用于维持HDMEC细胞的冷冻存活性。

• 在传代操作后，选择对数生长期的HDMEC细胞，离心并弃去培养基。

• 按照适当密度（1-10×10⁶ cells/mL）将细胞与冻存液混匀，分装入冻存管，每管约1 mL。

• 冻存管置于程序降温盒中，在-80℃冰箱中以约-1℃/分钟降温过夜。随后，将冻存管转移至液氮罐中长期保存。

• 避免HDMEC细胞的反复冻融操作，以提高复苏效率和功能恢复。