原代人胚肺成纤维细胞（HFL-1）是一类重要的间充质细胞，来源于正常胎儿肺组织，通常通过怀孕早期（如12-16周）因母体健康或胎儿异常实施的医学手术获取。HFL-1细胞系在第七代建立，能够稳定传代至46代。作为疏松结缔组织的主要细胞成分，HFL-1细胞具有合成和分泌细胞外基质（ECM）的能力，参与组织修复和再生，在肺组织中维持正常功能并在纤维化等疾病中发挥关键作用。

HFL-1人胚肺成纤维细胞形态学表现为贴壁生长，细胞质透明，胞核呈椭圆形且核仁明显，新分离的细胞悬浮于培养基中，短时间内贴壁并逐渐伸展形成梭形，5-7天后达到融合状态，形成紧密交叉或网状结构。

HFL-1细胞纯度超过90%，且无HIV-1、HBV、HCV等病原体污染。HFL-1细胞因其稳定的生长能力和明确的生物学特性，被广泛应用于肺部疾病和纤维化机制研究、细胞因子合成调控、动态平衡维持以及药物筛选和病理机制研究中，成为肺损伤与疾病研究的可靠模型。

HFL-1原代人胚肺成纤维细胞特性特征

• 细胞外基质（ECM）合成：HFL-1细胞主要负责合成和分泌细胞外基质成分，如胶原蛋白、纤维连接蛋白（Fibronectin）等，这些成分对维持肺组织的结构和功能至关重要。

• 标志物表达：通过免疫荧光染色，可以检测到HFL-1细胞中纤维连接蛋白（Fibronectin）和波形蛋白（Vimentin）的表达，这些标志物表明其为成纤维细胞。

• 基因表达：HFL-1细胞中与纤维化相关的基因如转化生长因子β（TGF-β）及其受体的表达水平较高，这与其在肺部疾病中的作用密切相关。

• 衰老相关标志物：研究表明，HFL-1细胞在受到刺激（如TGF-β处理）后，会显著上调衰老相关标志物P16、P21和P53的表达。

• 组织修复：HFL-1细胞在组织损伤后参与修复过程，对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复起着重要作用。

• 细胞因子合成：HFL-1人胚肺成纤维细胞在合成和分泌细胞因子方面也发挥着重要作用，有助于维持血管内外环境的动态平衡。

HFL-1原代人胚肺成纤维细胞参数表

原代HFL-1人胚肺成纤维细胞培养教程

细胞接种

• 将冻存的原代HFL-1细胞从液氮中取出，迅速放入37°C水浴中解冻，轻轻摇晃冻存管直至细胞完全融化。

• 将解冻后的细胞悬液迅速转移至离心管中，加入10倍体积的预热培养基稀释DMSO。以1000 RPM离心3-5分钟后弃去上清液。

• 将细胞重悬于新鲜培养基中，按1×10⁵个细胞/瓶的密度接种到T25培养瓶中。将培养瓶置于培养箱内培养，确保原代HFL-1细胞状态恢复良好。

细胞传代

• 每2-3天更换一次培养基，去除代谢废物及脱落细胞，确保原代HFL-1细胞处于理想的生长状态。

• 当细胞融合度达到80%-90%时，可进行传代操作。

• 用PBS洗涤细胞1-2次，去除残余培养基。

• 加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液（1-2 mL），在37°C下消化1-2分钟，期间轻轻拍打瓶壁，观察细胞是否脱落。

• 当细胞变圆开始脱落时，加入含10%胎牛血清的培养基终止消化。

• 转移细胞悬液至离心管中，以1000 RPM离心3-5分钟，去除上清液。

• 将细胞重悬于新鲜培养基中，并按1:3至1:4比例分瓶传代，继续培养。

细胞冻存

• 在对数生长期收集原代HFL-1细胞，操作步骤与传代相同。

• 配制含60% F-12K培养基、30%胎牛血清和10% DMSO的冻存液，将细胞悬浮其中，细胞浓度控制为1×10⁶~2×10⁶个细胞/mL。

• 将细胞悬液分装至冻存管中，置于降温盒内，以每分钟1°C的降温速率在−80°C冰箱中过夜，随后转移至液氮储存。

细胞复苏

• 从液氮中取出冻存管，立即放入37°C水浴中快速解冻，轻轻摇晃直至细胞完全融化。

• 将细胞悬液转移至离心管，加入10倍体积的预热培养基稀释DMSO，离心去除上清液。

• 将复苏后的原代HFL-1细胞重悬于培养基中，并接种到T25培养瓶中，放入培养箱培养以恢复细胞活性。