人心肌成纤维细胞（human cardiac fibroblasts, hCF）是心脏组织中主要的非心肌细胞，约占非心肌细胞总数的90%，在心脏所有细胞中占比约为70%。人心肌成纤维细胞来源于胚胎时期的间充质细胞，形态上呈纺锤形或星形，细胞核卵圆，核仁明显，细胞质嗜弱碱性，具有显著的蛋白质合成与分泌功能，可分泌胶原纤维、弹性纤维等基质成分。人原代心肌成纤维细胞通常来源于流产胎儿心脏组织、心脏手术获取的组织，或通过细胞重编程技术从其他体细胞诱导获得。

研究发现人原代心肌成纤维细胞不仅在结构上支持心肌细胞，还通过自分泌和旁分泌功能调控心肌功能，尤其在心肌梗死、心脏纤维化等病理状态下，心肌成纤维细胞的过度增殖和活化会导致心脏结构的重塑，因此对其研究在心血管疾病领域具有重要意义。

心肌成纤维细胞特性特征

• 贴壁能力：人心肌成纤维细胞呈圆形悬浮于培养基中，30分钟后开始贴壁，并逐渐伸展成梭形或扁平状；6小时后贴壁完成，细胞生长迅速，5-7天达到融合状态。

• 增殖能力：作为终末分化细胞，心肌成纤维细胞的增殖能力较弱，不建议进行扩增培养。

• 生长状态：细胞在生长过程中会形成网状结构，彼此连接，并且在一定条件下可以实现与其他成纤维细胞的互相转化。

• 心肌成纤维细胞在心脏中主要负责基质的合成与分泌，为心肌细胞提供结构支持，并在心脏损伤时通过旁分泌因子参与修复过程。

• 标志性蛋白：心肌成纤维细胞通过免疫荧光染色可以检测到纤维连接蛋白（Fibronectin）和波形蛋白（Vimentin），这些都是其典型的标志性蛋白。

• 细胞质特性：细胞质呈弱碱性，具有明显的蛋白质合成和分泌活动。

• 基因表达：心肌成纤维细胞表达多种与细胞外基质合成相关的基因，如胶原基因（COL1A1、COL3A1等），以及参与信号传导和生长因子合成的基因（如TGF-β）。

• 转录因子：心肌成纤维细胞中常见的转录因子包括SNAIL和SLUG，它们在调控细胞迁移和增殖中发挥重要作用

人原代心肌成纤维细胞参数表

人原代心肌成纤维细胞培养教程

细胞培养

• 将分离得到的细胞悬液转移至T25或T75细胞培养瓶中，加入适量培养基，确保人心肌成纤维细胞在贴壁初期具有充足的营养。

• 置于37°C、5% CO₂的培养箱中，静置30分钟，促进人心肌成纤维细胞贴壁。

• 贴壁后6小时更换一次培养基，以去除未附着的人心肌成纤维细胞和残留的消化酶。

• 每2-3天更换培养基，观察人心肌成纤维细胞的形态和生长情况。

细胞传代

• 人心肌成纤维细胞在5-7天内通常可达80%-90%的融合状态，准备进行传代。

• 用PBS洗涤培养瓶，以去除残留培养基，确保人心肌成纤维细胞不受杂质干扰。

• 加入胰蛋白酶，37°C下处理2-5分钟，观察人心肌成纤维细胞逐渐脱落。

• 用含10% FBS的培养基中和胰蛋白酶，收集人心肌成纤维细胞悬液，并离心（1000 rpm, 5分钟）。

• 去除上清液，加入新鲜培养基重悬人心肌成纤维细胞，按1:2或1:3比例进行传代培养。

冻存

• 收集并计数人心肌成纤维细胞，调整浓度至1×10⁶-2×10⁶ cells/mL。

• 使用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬人心肌成纤维细胞，转移至冻存管。

• 在-80°C降温24小时后，将冻存管转移至液氮中长期保存。

细胞复苏

• 从液氮中取出冻存管，37°C水浴快速融化。

• 将人心肌成纤维细胞悬液转移至含培养基的离心管中，离心去除DMSO。

• 用新鲜培养基重悬细胞，转移至培养瓶中，置于培养箱内继续培养。

注意事项

• 无菌操作：在培养人心肌成纤维细胞的过程中，需严格执行无菌操作，以防止细菌、真菌等污染。

• 温度和pH控制：确保培养箱内的温度稳定在37°C，CO₂浓度保持在5%，定期监测培养基的pH值（通常为7.2-7.4），以维持人心肌成纤维细胞的正常生长。

• 细胞监测：定期观察人心肌成纤维细胞的形态变化，及时更换培养基，避免细胞过度融合影响实验效果。