原代人口腔上皮细胞是从健康个体的口腔黏膜（主要为颊部和舌部区域）中分离获得的一类复层扁平上皮细胞。人口腔上皮细胞呈扁平或多边形，形态不规则，贴壁生长，基底层细胞为矮柱状，具有较强的增殖和分化能力，可不断更新替代表层脱落的细胞。

细胞培养采用含表皮生长因子（EGF）的特定培养基，有助于维持其增殖能力和表型特征。原代人口腔上皮细胞广泛应用于口腔疾病研究、药物筛选和黏膜免疫研究中，是研究口腔癌、口腔溃疡等疾病的重要体外模型。

人口腔上皮细胞特性特征

• 原代人口腔上皮细胞表达多种与上皮细胞功能相关的基因，包括角蛋白（如KRT14、KRT4）和粘附分子（如E-cadherin），这些基因对于维持上皮屏障功能至关重要。

• 人口腔上皮细胞可能表达转化生长因子β（TGF-β），该因子在组织修复和纤维化过程中起着重要作用。此外，生长因子如表皮生长因子（EGF）也可能影响其增殖和分化。

• 原代人口腔上皮细胞参与多条信号通路，如MAPK通路和PI3K/Akt通路，这些通路与细胞增殖、存活及应激反应密切相关。

• 由于其良好的增殖能力和生物相容性，原代人口腔上皮细胞被广泛应用于口腔疾病机制研究、药物筛选及毒理学测试

人口腔上皮细胞参数表

原代人口腔上皮细胞培养教程

人口腔上皮细胞的提取和分离

• 在局部麻醉下，通过小型手术或活检从口腔黏膜（主要为颊部）获取组织样本，提取人口腔上皮细胞。

• 使用消毒牙签在口腔内壁轻轻刮取黏膜，避免损伤牙齿或其他组织，以获取高质量的人口腔上皮细胞。

• 将获取的黏膜组织置于含有生理盐水的无菌培养皿中，切碎组织以释放人口腔上皮细胞。

• 使用0.2%-0.3%的胶原酶消化组织30-60分钟，帮助分离人口腔上皮细胞。

• 消化结束后，用离心机低速离心（300g，5分钟）收集人口腔上皮细胞。

• 将人口腔上皮细胞沉淀重悬于含有培养基的悬液中，准备进行培养。

人口腔上皮细胞的培养

• 将分离得到的人口腔上皮细胞悬液接种到培养瓶中，加入预先准备好的DMEM或F-10培养基。

• 培养初期，每2-3天更换一次培养基，维持人口腔上皮细胞的生长环境。

• 使用显微镜观察人口腔上皮细胞的形态，健康的细胞呈扁平或多边形，贴壁生长。

• 观察到人口腔上皮细胞融合度达到80%-90%时，准备进行细胞传代。

人口腔上皮细胞的传代

• 用PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤人口腔上皮细胞，去除残留的培养基。

• 加入0.25%的胰蛋白酶，消化人口腔上皮细胞1-2分钟，使其脱落。

• 中和胰蛋白酶后，轻轻吹打使人口腔上皮细胞悬浮。

• 将人口腔上皮细胞悬液按照1:2至1:3的比例稀释，并转移到新的培养瓶中，加入新鲜培养基。

注意事项

• 在提取和培养人口腔上皮细胞的过程中，所有操作需在无菌环境中进行，以防止污染。

• 保持培养箱温度在37℃，CO₂浓度为5%，以提供适宜的环境，促进人口腔上皮细胞的健康生长。

• 每2-3天更换培养基，提供新鲜营养，并清除代谢废物，以维持人口腔上皮细胞的最佳生长状态。

• 定期显微镜观察，若发现人口腔上皮细胞异常生长或污染，应及时处理。

• 为长期保存人口腔上皮细胞，可用10% DMSO的冷冻保护液处理细胞，并置于液氮罐中储存，以维持细胞活性。