人原代输尿管上皮细胞源自正常人输尿管组织。

输尿管是一对细长的管道，连接着肾脏和膀胱，其结构包括筋膜层、肌肉层和粘膜层。粘膜层含有移行上皮细胞，通常有4-5层。输尿管上皮细胞是输尿管生物学研究的基础，也是尿路上皮肿瘤和输尿管损伤等研究的重要对象。

输尿管上皮细胞特性

• 输尿管连接着肾脏和膀胱，呈扁圆柱状，约25-35厘米长，直径约为0.5-0.7厘米。

• 输尿管的结构包括三层管壁：筋膜层、肌肉层和粘膜层。粘膜层内含有移行上皮细胞，通常呈4-5层。

• 人输尿管上皮细胞是输尿管生物学研究的基础。

• 经过广谱角蛋白（PCK）免疫荧光染色鉴定，确定其为输尿管上皮细胞，细胞纯度高于90%。

• 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等病原体。

• 输尿管上皮细胞生长方式为上皮样，适合于贴壁培养。

• 人输尿管上皮细胞在尿路上皮肿瘤、输尿管损伤和组织工程学研究等领域有广泛应用。

输尿管上皮细胞参数表

人原代输尿管上皮细胞培养教程

准备工作

• 准备PBS（磷酸盐缓冲盐水）和0.25%胰酶。

• 准备含血清的完全培养基并预热至37摄氏度。

传代步骤：

• 从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃。

• 用PBS轻轻冲洗细胞，每10cm²培养表面积使用约2mL PBS。轻轻加入冲洗液以避免搅动细胞层，前后轻柔摇晃容器数次。

• 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃，向培养瓶中加入0.25%胰酶（试剂量应足以覆盖细胞层）。轻轻摇晃容器，使试剂完全覆盖细胞层，对于T25细胞培养瓶留约200 μL。

• 将培养容器放在培养箱中孵育5分钟左右，在显微镜下观察细胞解离情况。

• 当细胞解离程度≥90%时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽，加入所用胰酶两倍体积的完全培养基，吹打细胞层表面数次，使培养基分散。

• 将细胞转移到无菌离心管中，以200×g的离心力离心3-5分钟。

• 用最少体积的完全培养基重新悬浮细胞沉淀，将细胞悬液按照推荐比例稀释，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中，再将细胞放回培养箱。

注意事项：

1. 细胞密度越高越难消化，一般0.25%胰酶消化3-5分钟。

2. 当细胞难以消化时，可通过延长消化时间或分次消化。

3. 分次消化步骤：使用预热的PBS和胰酶进行消化，直到细胞块中间全部收缩变圆。