人支气管上皮细胞是一种位于呼吸道黏膜表面的细胞，是呼吸系统中不可或缺的一部分，是气道黏膜层的主要组成成分。
人支气管上皮细胞形态多样，可呈现出单层或多层立方状、柱状上皮细胞，表面覆盖着微绒毛和纤毛等结构。这些微绒毛和纤毛的存在有助于分泌黏液并有效清除气道中的异物。是呼吸道的第一道防线，阻止外界有害物质如微生物、颗粒物和化学物质进入肺部。除了形成屏障外，它们还参与各种生理过程，如免疫调节、分泌黏液以及气道的修复和重塑。

人支气管上皮细胞特性

• 人支气管上皮细胞来源呼吸道黏膜表面的细胞。

• 人支气管上皮细胞形态多样，可为单层或多层立方状、柱状上皮细胞，表面覆盖微绒毛和纤毛。

• 人支气管包括形成气道的外部保护屏障、阻止有害物质进入肺部、免疫调节、黏液分泌、气道修复和重塑。

• 人支气管上皮细胞通常从正常的支气管组织中获得。

人支气管上皮细胞参数表

人原代支气管上皮细胞分离与培养

实验材料：

• 手术切除的含支气管的正常肺组织

• 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶，0.5mmol/L EDTA

• 6孔培养板：用多聚赖氨酸包被

• 不含Ca2+ 和Mg2+的1×PBS（pH=7.2），添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4

• 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊

• 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

• 用含双抗的1×PBS（pH=7.2）反复清洗手术切除的肺组织；

• 使用眼科剪小心剪下肺叶中的白色支气管组织；

• 用含双抗的1×PBS（pH=7.2）反复冲洗支气管组织；

• 将支气管组织剪成1mm3左右大小的组织块；

• 用含双抗的1×PBS（pH=7.2）反复清洗组织块；

• 将组织块转入15ml离心管中，离心2min，去除1×PBS（pH=7.2）；

• 加入组织块4-5倍体积的胰酶，37℃水浴中消化30min，不时震荡；

• 消化完成后，加入胶原酶Ⅱ，37℃水浴中消化1h，不时震荡；

• 小心吸出上层悬液，转入另一离心管中；

• 离心5min，倾去上层液体，加入培养基重悬细胞，转入6孔板中，37℃、5%CO2的培养箱中培养。

培养基准备：

• 角质细胞无血清培养基或者KM，添加对应因子，再添加0.005mg/ml胰岛素、500ng/ml氢化可的松、1%P/S来培养细胞。

• 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

• 冻存液：90%血清，10%DMSO，液氮储存。

细胞处理：

• 将含有细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；

• 离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞，加入含6-8ml完全培养基的培养瓶中，37℃培养过夜；

• 若细胞密度达80%-90%，进行传代培养。

细胞冻存：

• 加入含10%FBS的培养基来终止消化，将细胞悬液分装入培养瓶中，37℃培养过夜；

• 第二天观察细胞生长情况和细胞密度，进行传代培养。

• 如果需要冻存细胞，建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。