牙髓间充质干细胞（原代人牙髓干细胞）

牙髓干细胞（DPSCs）来源于人体牙齿内部的牙髓组织的成纤维状细胞。人牙髓干细胞与骨髓间充质干细胞（MSC）非常相似，在2000年Gronthos等人的研究中首次被发现。DPSCs不仅能够自我更新，还具有多向分化的能力，可转变为硬骨、脂肪、软骨、肌肉和神经等多种细胞类型。

除了DPSCs外，牙齿中还存在其他类型的干细胞，如SHED、SCAP和牙周干细胞，它们共同展现了牙齿作为干细胞库的潜力。这种潜力催生了乳牙银行的出现，用于保存脱落的乳牙，并提取其中的DPSCs以备将来可能的应用。

牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内，与神经、血管、淋巴和结缔组织相伴。其内的造牙本质细胞负责牙本质的形成。由于受到不同病源刺激物的作用，牙髓可能出现不同的病理变化，表现为一系列不同的临床症状和体征，包括急性牙髓炎症。

牙髓间充质干细胞特性

牙髓干细胞（DPSCs）是位于牙齿内部牙髓组织中的一种成纤维状细胞，与骨髓间充质干细胞（MSC）相似。
DPSCs可自我更新和多向分化，能分化为硬骨、脂肪、软骨、肌肉和神经等细胞类型。
除了DPSCs外，牙齿中还发现了其他干细胞类型，如SHED、SCAP和牙周干细胞。
DPSCs可从脱落的乳牙和拔除的智齿中提取。
牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内，主要包含神经、血管、淋巴和结缔组织，以及造牙本质细胞。

牙髓间充质干细胞DPSCs参数表

名称	牙髓干细胞（Dental Pulp Stem Cells，DPSCs）
类型	成纤维状细胞
来源	牙齿内部的牙髓组织
免疫表型	与骨髓间充质干细胞（MSC）相似
形态	梭形
分化能力	自我更新多向分化（硬骨、脂肪、软骨、肌肉、神经等细胞类型）
克隆能力	较强
其他发现的干细胞类型	乳牙牙髓干细胞（SHED）、未完全发育牙根尖干细胞（SCAP）、牙周干细胞（periodontal stem cells）等
提取来源	6岁至11岁儿童脱落的乳牙；成人需要拔除的智齿
培养环境	培养基：含有足够的营养物质；温度：37°C（体温）；湿度：5% CO2水平下的95%湿度；pH值：7.4
生长方式	贴壁培养，成纤维样细胞
质量控制	细菌、真菌、支原体、内毒素检测 - 细胞复苏活力检测，复苏存活率>80% - 细胞周期检测
倍增周期	<72 h
鉴定	STRO-1免疫荧光染色为阳性；经鉴定细胞纯度高于90%
检测结果	不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
应用领域	口腔医学、骨科学、心血管学、神经学等
其他标记性指标	STRO-1为阳性<br>- CD146、CD44阳性率>70%，CD34、CD45阳性率<5%
应用前景	治疗龋齿、促进牙本质再生、用于再生医学和组织工程等领域
伦理争议	无，因为来源于废弃的组织
涉及应用	慢性牙周炎、唇裂、牙龈疾病、儿童间质性肺病、牙髓疾病、口腔疾病、牙髓坏死、坏疽、感染、口腔异常、牙周疾病、口颌疾病、牙病、先天性发育异常。

培养教程

牙髓干细胞牙髓间充质干细胞(DPSCs)的分离、传代和培养

材料和试剂

牛磷酸盐缓冲盐水(DPBS)、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)+L、谷氨酰胺(L-Glutamine)、非必须性氨基酸(NEAA)、双抗(抗生素/抗菌素)、胰酶-EDTA、冻存液、无菌手术器具和培养皿；

分离培养步骤：

将新鲜采集的牙髓置于10cm培养皿中，用DPBS清洗3遍，避免污染。
加入5ml完全培养基(配置：DMEM/F12 + 20% FBS + 1% L-Glutamine + 1% NEAA + 1% 双抗)浸润牙髓组织，并用无菌手术剪将其剪碎。
将剪碎的组织块固定在培养皿中，于37℃、5% CO2培养箱孵育30min，使其黏附在培养皿壁上。
将固定的组织块接种于6cm培养皿中，加入2ml完全培养基。
每48小时更换1次完全培养基，直到细胞从组织块中爬出。
细胞达到80%~90%后，使用胰酶-EDTA按1:3比例进行传代。

传代和培养步骤：

弃去培养皿中的培养基，轻轻用DPBS冲洗1次。
加入适量胰酶-EDTA，于37℃、5% CO2培养箱中作用2~3分钟，直到细胞完全脱落。
加入完全培养基，混匀后离心，去除上清。
重新悬浮细胞，并按1:31:4的比例进行传代，或以36*10^4个/ml的细胞密度接种至培养器皿中。
每2天更换1次培养基，直到细胞达到80%的融合度。
参照分离培养步骤1~3，收获细胞。
如需冻存，悬浮细胞于冻存液中后放置于-80℃冰箱24小时，转入液氮罐冻存。