PIEC（Porcine Iliac Endothelial Cells，猪髋动脉内皮细胞）是一种来自猪髋动脉的内皮细胞系，因其自发永生化特性而广泛用于生物医学研究。PIEC细胞分离过程从健康猪髋动脉中获取内皮组织，通过胰蛋白酶和胶原酶联合消化法解离成单个细胞，再通过差速贴壁法富集内皮细胞。PIEC细胞形态呈上皮样结构，贴壁生长。PIEC细胞被广泛应用于血管生物学、药物筛选和生物材料相容性等领域的研究。

PIEC细胞特性特征

• 自发永生化：PIEC细胞具有自发永生化的特性，可以在体外长期培养而不丧失增殖能力。

• 免疫表型：PIEC细胞可通过CD31和vWF（von Willebrand因子）进行鉴定，这些标志物是内皮细胞的特征性分子。

• 细胞表面蛋白：PIEC细胞表达多种内皮细胞相关的表面蛋白，如E-cadherin（上皮钙粘蛋白），这对于维持细胞的极性和粘附功能至关重要。

• 基因表达：PIEC细胞中与内皮功能相关的基因（如VEGF、eNOS等）通常表现出较高的表达水平，这些基因在血管生成和内皮功能中起到关键作用。

• 转录因子：在PIEC细胞中，某些转录因子的表达（如KLF2、KLF4等）与内皮功能密切相关，这些转录因子在调控血管生成和内皮稳态方面发挥重要作用

PIEC猪髋动脉内皮细胞参数表

PIEC猪髋动脉内皮细胞培养教程

PIEC细胞复苏

• 配制RPMI-1640培养基，加入10% FBS和1%抗生素，混合均匀后在37℃水浴中预热，以适应PIEC细胞的生长需求。

• 从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的PIEC细胞管，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动1分钟，直到PIEC细胞完全解冻。

• 将解冻的PIEC细胞迅速转移到15 ml离心管中，加入10 ml预热的完全培养基，以1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用2 ml完全培养基轻轻重悬PIEC细胞，并转移至T25培养瓶中。

• 将培养瓶放入培养箱中，24小时后检查PIEC细胞贴壁情况，并更换新鲜培养基去除死细胞。

PIEC细胞传代

• 当PIEC细胞达到80%-90%汇合度时，可进行传代。吸弃培养基，并用1 ml无菌PBS轻轻洗涤以去除残留的血清，确保PIEC细胞不受干扰。

• 加入1 ml 0.25%胰酶，均匀覆盖PIEC细胞后，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察PIEC细胞形态变化，出现细胞变圆、松散时即刻停止消化。

• 加入1 ml完全培养基终止消化，用移液器轻轻吹打，使PIEC细胞脱落形成单细胞悬液。

• 将悬液转移至15 ml离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用新鲜的完全培养基重悬PIEC细胞，根据实验需求按1:2或1:3的比例转移至新的培养瓶中，补充培养基后放入培养箱继续培养。

PIEC细胞冻存

• 按照传代步骤收集PIEC细胞，计数后制备浓度为1×10^6个/ml的PIEC细胞悬液。冻存液配方为90%完全培养基和10% DMSO（二甲基亚砜）。

• 将重悬的PIEC细胞液转移至1.2 ml冻存管中，密封好并放入程序冻存盒中。

• 初步在-80℃冷冻24小时后，将PIEC细胞冻存管转移至液氮中长期保存。

注意事项

• 无菌操作：整个PIEC细胞培养过程中，始终保持无菌操作，防止细菌、真菌和支原体污染，确保PIEC细胞的高纯度。

• 胰酶消化时间控制：PIEC细胞消化时间不宜过长，以免造成细胞损伤。

• 培养基更新：PIEC细胞传代时应使用新鲜培养基，避免重复使用经过多次处理的培养基，防止营养缺乏和污染。