中国仓鼠肺细胞（CHL）是一种由一日龄雌性中国仓鼠（Cricetulus griseus）肺组织衍生的成纤维样贴壁细胞系，最早由Koyama等人在1970年建立，经过自发性永生化处理后形成了稳定的增殖能力。CHL细胞呈成纤维细胞样形态，具有良好的贴壁生长特性，适应性较强。CHL细胞系因其对化学物质的高度敏感性，被广泛应用于染色体畸变检测、基因表达研究、药物筛选和毒理学评估等生物医学研究领域，是细胞毒性和遗传毒性研究中的重要工具。

CHL细胞特性特征

• 关键基因: CHL细胞表达多种基因，包括人组织型纤溶酶原激活剂（t-PA），这使其在研究纤溶过程和相关疾病时具有重要价值。

• 生物标志物: CHL细胞在化学诱导染色体畸变实验中表现出对多种化学物质的敏感性，是检测染色体异常的重要模型

CHL细胞参数表

中国仓鼠肺成纤维细胞CHL培养教程

复苏步骤

• 预热培养基：在37℃水浴中预热5 ml完全培养基，以利于CHL细胞的复苏。

• 解冻细胞：从液氮罐中取出冻存的CHL细胞管，立即置于37℃水浴中，轻轻摇动，快速解冻（约1分钟）。

• 离心清洗：将解冻后的CHL细胞悬液转入15 ml离心管，加入预热的完全培养基混匀，1000 rpm离心5分钟。

• 重悬细胞：弃去上清液，加入2 ml完全培养基轻轻重悬CHL细胞。

• 接种培养：将重悬后的CHL细胞转移至T25培养瓶，补足至10 ml完全培养基，置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

• 贴壁观察：复苏24小时后，观察CHL细胞贴壁情况，若发现未贴壁细胞，可弃去培养基并更换新鲜培养基。

CHL细胞传代

• 生长状态检查：当CHL细胞达到80%-90%汇合度时即可进行传代操作。

• PBS洗涤：吸弃旧培养基，加入1 ml无菌PBS轻轻冲洗CHL细胞一次，以去除残余的培养基和血清。

• 胰酶消化：加入1 ml胰酶确保均匀覆盖，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，观察CHL细胞皱缩但尚未完全脱落。

• 终止消化：加入2-3 ml完全培养基中和胰酶，用手轻拍培养瓶底部，帮助CHL细胞脱落。

• 离心收集：将CHL细胞悬液转入15 ml离心管，1000 rpm离心5分钟，吸弃上清。

• 重悬和分瓶：用完全培养基重悬CHL细胞，按1:2或1:4的比例接种至新的T25培养瓶或其他规格的培养瓶中。

CHL细胞冻存

• 收集细胞：按传代步骤获得CHL细胞沉淀，并计数细胞浓度（约200-300万/ml）。

• 重悬细胞：用预冷冻存液轻轻重悬CHL细胞，将细胞悬液转入标记好的冻存管中。

• 程序冻存：将冻存管置于程序冻存盒中，在-80℃冰箱中过夜，再转入液氮保存。若无程序冻存盒，可将CHL细胞冻存管置于泡沫盒中，在4℃静置5-10分钟后转入-80℃冰箱。

注意事项

• 消化和传代过程中避免气泡产生，以防对CHL细胞造成损伤。

• 胰酶消化时间需精确控制，过长或过短可能影响CHL细胞状态。

• 定期检查CHL细胞生长状态，及时更换培养基和传代，以维持细胞的健康生长。