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产品名称:CHO-K1细胞(仓鼠卵巢细胞亚株)
产品详细说明
  • 来源:卵巢
  • 细胞特征:贴壁细胞 , 上皮细胞样
  • 培养基:Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S
  • 其他:CHO细胞是生产治疗性蛋白质的首选宿主,市场上超过70%的蛋白质药物均由CHO细胞生产

CHO-K1细胞(Chinese Hamster Ovary K1),中国仓鼠卵巢细胞K1亚克隆,源自亲本CHO细胞系。CHO-K1细胞系于1957年由Theodore Puck在波士顿癌症研究基金会实验室首次分离,来源为成年雌性中国仓鼠的卵巢组织。CHO-K1细胞自1948年起在美国用于多种生物医学研究,随着亚克隆CHO-K1的分离,逐渐成为实验室研究和工业生产中的重要工具。

CHO-K1细胞广泛应用于生物技术和医药研究,尤其适合作为蛋白质药物生产和重组蛋白表达的宿主系统。1968年的研究还揭示了CHO-K1细胞缺乏合成甘氨酸的关键基因,因此需要在培养基中额外补充脯氨酸以维持其正常生长。

CHO-K1细胞特性特征

  • 倍体性:CHO-K1细胞的染色体组成为2n=22,属于亚二倍体(hypodiploid),表现出一定的遗传不稳定性。

  • 营养需求:CHO-K1细胞需要培养基中添加脯氨酸以支持其生长,因为它缺乏合成脯氨酸的能力。

  • 培养条件:适合在无血清或无动物成分的培养基中生长,能够在高密度下进行悬浮培养。

  • 病毒感染:CHO-K1细胞对水疱性口炎病毒(包括印第安纳州和格拉斯哥株)及盖塔病毒具有易感性。

  • 基因组稳定性:CHO-K1细胞的基因组可能经历了大规模的染色体重排,导致不同细胞系间染色体数目不一致。

  • 翻译后修饰能力:CHO-K1细胞能够进行复杂的翻译后修饰,生成与人类蛋白质相似的糖蛋白,是成为生产生物仿制药的理想宿主。

  • 组蛋白表达:CHO-K1细胞常用于重组蛋白的表达,能够有效地插入复杂的N-连接聚糖,有助于蛋白质折叠和运输。其糖基化模式接近人类细胞,这提高了蛋白质在体内的稳定性和活性。

  • 高产能力:CHO-K1细胞系在大规模培养中表现出高水平的蛋白质表达,适合用于工业化生产。

  • 遗传背景:CHO-K1细胞缺乏甘氨酸生物合成所需的基因,这一遗传缺陷使其依赖于外源性的脯氨酸。此外,CHO-K1细胞与大多数人类硫酸乙酰肝素葡糖胺O-磺基转移酶有同源基因,这表明其在某些代谢途径上与人类存在相似性

CHO-K1细胞参数表

细胞名称 CHO-K1细胞(仓鼠卵巢细胞亚株)
细胞别称 CHO K1; CHOK1; CHO cell clone K1; GM15452
种属来源 中国仓鼠(Cricetulus griseus)
组织来源 卵巢
性别
细胞形态 上皮细胞样,贴壁生长
倍增时间 ~24小时
染色体组数 2n=22(亚二倍体)
生物安全等级 1
支原体检测
细胞规格 1×10^6 cells/T25培养瓶或冻存管包装
培养基 F-12K + 10% 胎牛血清(FBS)
培养条件 气相:95%空气 + 5% CO₂;温度:37℃
传代密度 80%-90%
传代比例 1:2至1:5
冻存条件 无血清冻存液,液氮储存
病毒易感性 水疱性口炎病毒、盖塔病毒
主要应用领域 工业生物技术、毒理学研究、重组蛋白表达
生长培养基 Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S
基因组稳定性 存在遗传不稳定性,可能具有不同的染色体数目,已知有21条染色体。
糖基化能力 能够进行复杂的翻译后修饰,生成与人类蛋白质相似的糖蛋白。
脯氨酸需求 缺乏脯氨酸合成基因,需要在培养基中添加L-脯氨酸才能生长。
冻存液配方 无血清冻存液
应用特性 CHO-K1细胞是市场上超过70%的蛋白质药物的首选制造宿主。
能够在无血清悬浮培养中以高密度生长,适合大规模生产。
表达的重组蛋白在结构和功能上接近天然蛋白。


培养教程

CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株培养教程

CHO-K1细胞复苏

  • 将CHO-K1细胞冻存管在37℃水浴中快速解冻,轻轻摇晃以防细胞损伤。

  • 将解冻后的CHO-K1细胞悬液加入4-6 mL完全培养基中,混合均匀。

  • 在1000 RPM下离心3-5分钟,弃去上清液,以确保CHO-K1细胞活性。

  • 用新配制的培养基重悬CHO-K1细胞,随后将细胞悬液加入6-8 mL完全培养基的T25培养瓶中,置于37℃培养箱中培养过夜。

  • 第二天观察CHO-K1细胞的贴壁和增殖情况,确保CHO-K1细胞的复苏顺利。

CHO-K1细胞传代

  • 当CHO-K1细胞密度达到80%-90%时,准备进行传代操作。

  • 方法一: 收集CHO-K1细胞后离心4分钟,去上清,用1-2 mL培养基重悬CHO-K1细胞,按1:2至1:5比例分至新的培养瓶中,补充8 mL培养基。

  • 方法二: 半数换液方式,弃去培养基的一半,轻轻悬起CHO-K1细胞,将悬液按1:2至1:3的比例分装至新皿或瓶中,加8 mL培养基继续培养。

CHO-K1细胞无血清驯化

  • 逐步降低血清浓度

  • 将贴壁的CHO-K1细胞换液,加入15 mL含血清的培养基和15 mL无血清培养基的混合液。

  • 每隔两天替换一半培养基,并补充等量的无血清CHO-K1细胞培养基,逐步降低胎牛血清浓度至低于1%。

  • 血清浓度逐步降低

  • 逐步降低CHO-K1细胞培养中的血清浓度至5%、2.5%、1.25%、0.625%、0%,最后在无血清的基础培养基(B001)中继续培养CHO-K1细胞。

  • 获得悬浮CHO-K1细胞

  • 当CHO-K1细胞密度在无血清培养基中达到5×10⁶ cells/mL时,即可获得悬浮状态的CHO-K1细胞。

CHO-K1细胞冻存

  • 准备CHO-K1细胞悬液

  • 收集消化后的CHO-K1细胞,用血球计数板计数,以确定冻存密度。推荐冻存浓度为1×10⁶至1×10⁷个活细胞/mL。

  • 在1000 RPM下离心3-5分钟,去上清液后,用配制好的冻存液重悬CHO-K1细胞。

  • 每管分装1 mL冻存液(含1×10⁶至1×10⁷个CHO-K1细胞),并标注细胞名称、代次及日期。

  • 将CHO-K1细胞冻存管放入程序降温盒中,在-80℃冷冻过夜,随后转移至液氮罐中长期保存。

CHO-K1细胞培养注意事项

  • 所有操作应在生物安全柜中进行,防止CHO-K1细胞污染。

  • 保持培养箱湿度在70%-80%,气相为95%空气和5% CO₂。

  • 定期记录CHO-K1细胞状态和密度,以确保实验数据的连续性和准确性。

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