RF/6A细胞（猴脉络膜视网膜内皮细胞）

RF/6A细胞是从恒河猴（Macaca mulatta）64天孕期胎儿的脉络膜和视网膜内皮细胞中分离。RF/6A细胞在培养早期发生了自发性转化，至今已传代超过540次，在细胞形态上表现为上皮样。RF/6A细胞广泛应用于视网膜疾病研究和药物筛选，其作为滋养层可有效支持眼色素上皮细胞的贴壁与增殖。在高代次传代后，RF/6A细胞表现出优良的贴壁和增殖特性，成为探索视网膜相关病理机制的重要工具，尤其在眼科领域的研究中具有重要价值。

RF/6A细胞特性特征

RF/6A细胞为自发永生化的细胞系，已传代超过540次，适合在标准培养条件下进行长期培养。
Weibel-Palade颗粒: 电镜观察显示RF/6A细胞中存在Weibel-Palade颗粒，这些颗粒是内皮细胞特有的结构，参与血管功能和血液凝固过程。
基因表达: RF/6A细胞表达因子VIII和纤维连接蛋白基因。
应用于滋养层: 高代次的RF/6A细胞常用于作为滋养层，以增强其他细胞（如眼色素层黑素细胞）的贴壁能力、转接能力和供养。

RF/6A猴脉络膜视网膜内皮细胞参数表

细胞名称	RF/6A细胞（猴脉络膜视网膜内皮细胞）
细胞别称	RF-6A
ATCC编号	CRL-1780
来源	恒河猴脉络膜和视网膜内皮细胞（64天孕期胎猴）
组织来源	脉络膜、视网膜
细胞形态	上皮细胞样，贴壁生长
细胞类型	正常细胞，自发永生化细胞系
生长特性	贴壁细胞
倍增时间	未具体说明
生物安全等级	BSL-1
无菌检测	细菌、酵母、支原体检测均为阴性
病原体检查	HIV、乙型肝炎、丙型肝炎检测均为阴性
基因表达情况	因子VIII、纤维连接蛋白基因
运输方式	干冰运输或常温发货
培养基	MEM（ATCC 改良）＋10% FBS＋1% P/S
培养环境	37℃，5% CO₂，饱和湿度
换液周期	每2-3天更换一次
培养基体积	T25瓶：10-12 mL；10 cm皿：12-15 mL
传代比例	1:2 - 1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）
冻存液配方	冻存液：55%基础培养基+40% FBS+5% DMSO 温度：液氮
冻存规格	每管200-300万/ml
冻存方法	使用程序降温盒，放入-80℃冰箱过夜后转入液氮保存
致瘤性	无
注意事项	高代次的RF/6A细胞可用作滋养层，以增强其他相关细胞的贴壁能力和生长。

培养教程

RF/6A猴脉络膜视网膜内皮细胞培养教程

RF6A细胞复苏步骤

取出冻存管，立即放入37℃水浴中，轻轻摇晃至细胞完全解冻。
解冻后，将RF6A细胞悬液转移至含4-6 mL完全培养基的离心管中，并轻轻混匀。
以1000 RPM离心3-5分钟，去除上清液。
用1-2 mL完全培养基重悬RF6A细胞沉淀。
将重悬的RF6A细胞加入含6-8 mL完全培养基的培养瓶中，置于37℃培养箱中过夜培养。
第二天使用显微镜检查RF6A细胞的贴壁情况和生长状态，确认复苏后的细胞生长正常。

RF6A细胞传代步骤

当RF6A细胞密度达到80%-90%时，可进行传代操作。
弃去旧培养基，用无钙镁的PBS轻轻洗涤RF6A细胞1-2次，以去除培养基残留和死细胞。
加入0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液（T25培养瓶1-2 mL，T75培养瓶2-3 mL），在37℃下消化1-2分钟。
在显微镜下观察RF6A细胞消化情况，待细胞开始圆化脱落后，迅速加入3-4 mL含10% FBS的培养基中和消化液。
以1000 RPM离心3-5分钟，去除上清，再用1-2 mL完全培养基轻轻重悬RF6A细胞。
将RF6A细胞悬液按1:2比例分种至新的T25培养瓶中，添加6-8 mL新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

RF6A细胞冻存步骤

传代时收集离心后的RF6A细胞沉淀，加入预先准备的冻存液，轻轻混匀。
将RF6A细胞悬液分装至已标记的冻存管中，每管约1 mL。
将冻存管置4℃静置5-10分钟，移至-20℃保存2小时，再置入-80℃过夜。
将冻存管置于程序降温盒中放入-80℃冰箱冷冻过夜。如无程序降温盒，按以下步骤：
次日将冻存管转入液氮罐长期保存，确保记录RF6A细胞的存放位置，便于后续取用。

注意事项

消化时间控制: 胰蛋白酶消化时间应依据不同品牌进行调整，以避免过度消化影响RF6A细胞活力。
无菌操作: 培养期间需严格保持无菌条件，避免污染。
RF6A细胞的高代次用途: 高代次的RF6A细胞可用于构建滋养层，以增强其他贴壁细胞的生长能力，特别是对眼色素上皮细胞具有显著的支持效果。