COS7细胞系（非洲绿猴SV40转化的肾细胞）

COS-7细胞系是从非洲绿猴（Chlorocebus aethiops）肾脏细胞经过SV40病毒转化而得到的细胞系，其来源追溯至最初从非洲绿猴肾脏组织分离出的CV-1细胞。在1980年代初，研究人员通过将带有编码野生型T抗原并具有起始失活突变的SV40病毒转染到CV-1细胞中，成功建立了COS7细胞。COS7细胞携带了SV40基因组中全部早期区域的组成型拷贝，持续表达SV40 T抗原，具备增殖能力和高效的转染特性。

COS7细胞形态类似于成纤维细胞，在体外条件下具有显著的增殖优势，适用于长时间培养。COS7细胞广泛应用于多种生物学研究，包括基因表达、蛋白质生产及药物筛选等领域，是一种极为重要的细胞模型系统。

COS7细胞系特性特征

COS7细胞含有来自SV40基因组全部早期区域的组成型拷贝，这使得它们能够持续表达SV40 T抗原。
T抗原的表达使得COS7细胞具备了无限增殖的能力，并提高了其转染效率。
COS7细胞常用于研究基因表达和蛋白质功能，尤其是在类固醇生成和受体功能相关的研究中。
研究表明COS7细胞能够将激素如睾酮代谢为其他类固醇产物

COS7细胞系参数表

细胞名称	COS7细胞系（非洲绿猴SV40转化的肾细胞）
细胞别称	Cos-7; COS7; CV-1 in Origin Simian-7
ATCC编号	CRL-1651
种属来源	非洲绿猴（Chlorocebus aethiops）
组织来源	肾脏
细胞形态	成纤维细胞样
生长特性	贴壁生长
基因表达情况	T抗原
传代比例	1:2至1:4
传代周期	每2-3天一次
培养基组成	90% DMEM + 10% FBS + 1% P/S
培养条件	温度：37℃；气相：95%空气 + 5% CO2
冻存条件	60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO，液氮储存
生物安全等级	2级
支原体检测	无支原体
质量检测	细菌、真菌检测均为阴性
细胞规格	1×10^6 cells/T25培养瓶
细胞代数限制	通常在10代以内
温度敏感性	支持40℃时温度敏感性A209病毒的复制
应用领域	基础生物学研究、药物筛选、毒性测试、基因表达研究等

培养教程

COS7非洲绿猴SV40转化的肾细胞培养教程

COS7细胞复苏步骤

取出COS7细胞冻存管：将冻存的COS7细胞从液氮罐中取出。
快速解冻：在37℃水浴中快速解冻1-2分钟，轻轻摇动冻存管，直到细胞完全融化。
将解冻后的COS7细胞悬液转移到离心管，加入4-6 mL预热的完全培养基，轻轻混匀。
以1000 RPM离心3-5分钟，去除上清液，减少DMSO对COS7细胞的毒性。
重悬COS7细胞：加入6-8 mL预热的完全培养基，将细胞轻轻吹打均匀。
接种培养：将重悬的COS7细胞移至培养瓶或培养皿，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

COS7细胞传代

观察细胞密度：当COS7细胞密度达80%-90%时，即可进行传代。
弃去旧培养基，用无钙镁的PBS缓冲液清洗COS7细胞1-2次，以去除血清残留，防止胰蛋白酶消化过程受影响。
加入0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA的混合消化液（如T25瓶使用1-2 mL），在37℃下消化1-2分钟。
在显微镜下观察细胞是否变圆、脱落，迅速加入含10% FBS的培养基中和消化作用。
将消化后的COS7细胞转移到离心管，以500 g离心2分钟，弃去上清液。
加入适量培养基重悬细胞，根据实验需求进行细胞计数。
接种新培养瓶：按1:2至1:4的比例将COS7细胞接种至新培养瓶或培养皿中。

COS7细胞冻存

制备COS7细胞冻存液：使用90%胎牛血清和10% DMSO的混合液作为COS7细胞冻存液。
收集细胞：在冻存前将已传代的COS7细胞离心，去除上清液，加入冻存液并轻轻混匀。
分装与冷冻：将混匀的COS7细胞悬液分装至冻存管中，每管约1 mL。
将冻存管放入程序降温盒中，在-80℃环境下预冻一夜后，转入液氮中长期保存。