LLC-MK2细胞（恒河猴肾细胞）

LLC-MK2（Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2）细胞系是一种上皮细胞系，源自成年恒河猴（Macaca mulatta）的肾脏组织。LLC-MK2细胞最初由RN Hull保藏，广泛应用于生物医学研究中，尤其在病毒学研究中具有显著价值。

在培养方面，LLC-MK2细胞的贴壁生长依赖于适宜的培养基，且需选择经质量检测的血清作为补充。研究表明，大量的马血清能够显著促进其生长；而更换其他血清类型通常会导致生长速率降低，并出现较长的生长滞后期。

LLC-MK2细胞特性特征

细胞名称	LLC-MK2细胞（恒河猴肾细胞）
细胞别称	Llc-Mk2; LLC-MK-2; LLCMK2; LLcMK2; Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2
ATCC编号	CCL-7
描述	源自六只成年绿猴的肾细胞悬液，对多种病毒敏感
种属	恒河猴（Macaca mulatta）
组织来源	肾脏
形态	上皮细胞
生长方式	贴壁生长
无菌检测	细菌、酵母、支原体检测均为阴性
病原体检查	HIV、乙型肝炎、丙型肝炎检查均为阴性
运输方式	复苏发货或干冰冷冻发货
安全性	所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护。
供应限制	仅供科学研究之用
培养基	MEM＋10% FBS＋1% P/S
温度	37°C
气相	95%空气，5%二氧化碳
培养基更换频率	每2-3天更换一次
最佳细胞密度	达到80%-90%时进行传代
传代比例	推荐1:2至1:10
冻存液	DMSO（终浓度10%）
冻存条件	-80°C保存2小时后转入液氮储存
基因表达	表达纤溶酶原激活剂

快速解冻: 将装有冻存LLC-MK2细胞的冻存管置于37℃水浴中快速解冻，轻轻摇晃以确保LLC-MK2细胞完全溶解。
离心清洗: 解冻后，立即加入4 ml预热的培养基，轻轻混匀，在1000 rpm条件下离心4分钟，去除上清液，减少冷冻保存介质对LLC-MK2细胞的影响。
重悬培养: 加入1-2 ml新鲜培养基重悬LLC-MK2细胞，将细胞悬液转移至新的培养瓶或10 cm培养皿中，补充约8 ml培养基，置于37℃培养箱中过夜培养。
培养基更换: 次日更换培养基，以去除LLC-MK2细胞冻存过程中残留的物质，同时观察细胞密度及状态。

准备工作: LLC-MK2细胞生长状态良好、无污染时，进行冻存操作。
细胞消化与计数: 弃去培养基，用PBS清洗一次，再加入1 ml胰酶消化，使LLC-MK2细胞脱落。随后加入等体积含血清的培养基终止消化，并进行细胞计数。
离心和重悬: 在1000 rpm条件下离心4分钟，弃去上清后根据细胞密度调整悬液体积，加入终浓度10%的DMSO和血清，制备LLC-MK2细胞悬液（密度不低于1 x 10^6/ml）。
分装与降温: 每支冻存管加入1 ml LLC-MK2细胞悬液，密封并标记。将冻存管放入程序降温盒中，以-1℃/分钟速率置于-80℃冰箱冷冻约2小时，然后转移至液氮罐中长期保存。

培养基和血清质量: 使用经过质量检测的胎牛血清，确保无杂质或污染。马血清可显著促进LLC-MK2细胞增殖，若更换其他类型血清，可能导致LLC-MK2细胞生长减缓。
记录与观察: 建议在收到LLC-MK2细胞的前三天，每日拍摄显微图像，记录LLC-MK2细胞形态和密度变化，以便后续参考。
操作环境: 所有LLC-MK2细胞操作均应在二级生物安全柜中进行，且必须穿戴防护装备，严格遵守实验室安全操作规范。