M-NFS-60细胞系是从小鼠髓性白血病中分离获得的一种淋巴母细胞形态，最早由JF Weaver等人建立，在白血病和免疫系统疾病的研究中具有广泛应用价值。

M-NFS-60细胞系来源于经过小鼠生态型逆转录病毒Cas-Br-MuLV感染的小鼠体内，这种病毒能诱导髓性白血病的发生。M-NFS-60细胞具备悬浮生长特性，形态呈淋巴母细胞样，主要分离自小鼠的外周血或骨髓组织。由于其对IL-3和M-CSF等生长因子的依赖性，体外培养时需在培养基中添加这些因子以支持细胞的增殖和维持生长。

M-NFS-60细胞特性特征

• 永生法：病毒转化

• M-NFS-60细胞系对多种生长因子（如白细胞介素-3 (IL-3) 和巨噬细胞集落刺激因子 (M-CSF)）具有高度敏感性。

• 基因特征：M-NFS-60细胞含有由逆转录病毒整合引起的截短型c-myb原癌基因。

• 表达特征：M-NFS-60细胞系在体外培养时表现出对多种生长因子的依赖性，尤其是IL-3和M-CSF

M-NFS-60细胞参数表

M-NFS-60小鼠髓性白血病淋巴细胞培养教程

细胞复苏

• 将冻存的NFS60细胞悬液（1 mL）迅速放入37℃的水浴中解冻，期间轻轻摇动，确保均匀解冻。

• 解冻后，立即将细胞悬液转移至含有4-6 mL预温的完全培养基中，培养基成分为RPMI-1640，补充10%胎牛血清（FBS）、62 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）和0.05 mM β-巯基乙醇。

• 将NFS60细胞悬液以1000 RPM离心4分钟，弃去上清。

• 重新加入1-2 mL完全培养基，轻轻吹打以重悬细胞。

• 将重悬后的NFS60细胞接种到T25培养瓶或10 cm培养皿中，置于37℃、5% CO₂培养箱中孵育过夜。

• 第二天检查NFS60细胞状态及密度，若细胞状态良好，可继续培养或换液。

NFS60细胞传代

• 当NFS60细胞密度达到80%-90%时，应进行传代。NFS60细胞系通常呈悬浮生长，定期传代有助于维持其健康的生长状态。

• 弃去旧培养基，用不含钙、镁离子的PBS缓冲液轻轻冲洗1-2次，以去除残留培养基。

• 加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液（0.25%胰蛋白酶、0.53 mM EDTA），37℃下消化1-2分钟。大多数NFS60细胞应开始变圆或脱落，若细胞变圆及时加入培养基终止消化。

• 将消化后的NFS60细胞重悬于适量的完全培养基中，离心（1000 RPM，4分钟）后，弃去上清。

• 将NFS60细胞按1:2比例稀释，并加入新的培养基进行培养。常用的培养基量为每瓶6-8 mL，确保NFS60细胞得到充分营养供应。

NFS60细胞冻存

• 冻存液配方为：55%基础培养基（RPMI-1640），40% FBS，5%二甲基亚砜（DMSO）。DMSO应现用现配，以确保其保护NFS60细胞在冷冻过程中的有效性。

• 收集状态良好的NFS60细胞并重悬于冻存液中，每个冻存管分装约1 mL细胞悬液。

• 将冻存管置于程序性降温盒中，放入-80℃冰箱中逐步冷冻。过夜后将冻存管转移至液氮中长期储存。

注意事项

• 无菌操作：在整个操作过程中应严格执行无菌操作，避免NFS60细胞污染。

• 温度控制：培养箱应保持恒定的37℃温度，CO₂浓度维持在5%。

• 生长因子添加：NFS60细胞对IL-3和M-CSF依赖性较强，确保培养基中补充这些生长因子以维持细胞的正常生长。

• 定期观察：及时观察NFS60细胞的密度和形态，确保传代及时，以避免细胞过度拥挤或营养不足。