PT-67小鼠逆转录病毒包装株是从TK-NIH/3T3细胞中衍生出的细胞系，专门用于产生复制缺陷的逆转录病毒载体。PT-67细胞系的起源可追溯至NIH 3T3细胞系。NIH 3T3细胞由George Todaro和Howard Green于1962年从NIH瑞士小鼠（NIH Swiss mice）的胚胎成纤维细胞中。PT67细胞通过原代培养，经每三天传代一次、接种约3×10^5个细胞，逐渐获得了能够持续增殖的永生化特性，最终形成了NIH 3T3这一经典的成纤维细胞系。

NIH 3T3细胞的生物学特征包括贴壁生长和接触抑制，形态上呈现纺锤形态。由于其在基因转染和细胞转化实验中的高效能，NIH 3T3被广泛用于生物医学研究领域。而PT-67则是在此基础上通过基因改造专门设计用于生产逆转录病毒颗粒，广泛应用于基因治疗、疫苗开发等方面。

PT67细胞特性特征

• 病毒颗粒生产：PT67细胞能够产生复制缺陷的逆转录病毒载体颗粒，这些颗粒能够结合靶细胞上的长臂猿白血病病毒受体Glvr-1（Pit-1）或双嗜性逆转录病毒受体Ram-1（Pit-2）进行有效的基因转导。

• 基因表达：PT67细胞系经过基因改造，具备高效的外源基因包装能力，适用于基因治疗和疫苗研发。

• PT-67小鼠逆转录病毒包装株广泛应用于基因传递、疫苗开发及其他生物医学研究领域。由于其能够高效产生逆转录病毒载体，成为研究病毒学和基因工程的重要工具

PT67小鼠逆转录病毒包装株参数表

PT67小鼠逆转录病毒包装株培养教程

PT67细胞复苏

• 迅速将含有PT67细胞的冻存管置于37℃水浴中解冻，约1-2分钟，直至细胞悬液完全解冻。

• 将解冻的PT67细胞转移至含有4-6 mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀以减少细胞损伤。

• 在1000 RPM下离心3-5分钟，弃去上清液。

• 加入适量的完全培养基（约1-2 mL）重悬PT67细胞。

• 将重悬后的PT67细胞移入T25培养瓶中，加入6-8 mL完全培养基。

• 将培养瓶置于37℃的培养箱中过夜培养，并在次日显微镜下检查PT67细胞的贴壁情况及生长状态。

PT67细胞传代

• 当PT67细胞的密度达到80%-90%时，可进行传代。细胞过密可能会导致生长抑制，因此应在适当密度下进行传代。

• 弃去培养瓶中的旧培养基，用预温的无钙镁PBS轻轻冲洗PT67细胞1-2次。

• 加入1 mL的胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%胰蛋白酶，0.53 mM EDTA），在37℃培养箱中消化1-2分钟。

• 观察PT67细胞的形态，当大部分细胞变圆且松散时，轻轻敲击培养瓶底部以促进细胞脱落。加入含有10% FBS的培养基终止消化。

• 将消化后的PT67细胞悬液转移至离心管中，1000 RPM离心3-5分钟，弃去上清液。

• 重新加入适量的完全培养基重悬PT67细胞，并按1:2比例进行传代，移入新的T25培养瓶，继续培养。

PT67细胞冻存

• 当PT67细胞生长状态良好且密度适中时，可进行冻存。冻存液的配方为90%完全培养基和10% DMSO。

• 将传代后的PT67细胞离心收集，弃去上清液，并用冻存液重悬细胞。

• 将PT67细胞悬液分装到冻存管中，每管约1 mL细胞悬液。

• 将冻存管置于-80℃冰箱中过夜预冻，次日转移至液氮罐中长期保存。