Sp2/0-Ag14细胞系是通过通过将经过绵羊红细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞与P3X63Ag8骨髓瘤细胞融合而形成的，是一种小鼠骨髓瘤细胞系，由B淋巴细胞从小鼠脾脏分离。主要用于单克隆抗体的生产。SP20细胞在免疫学研究中具有重要应用。

SP20细胞特性特征

• 不分泌免疫球蛋白: SP20细胞不分泌免疫球蛋白，这使其成为单克隆抗体生产的理想选择.

• 药物敏感性: SP20细胞系对20μg/ml的8-氮鸟嘌呤具有抗性，并且对HAT（次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸苷）敏感.

• 病毒检测: SP20细胞系鼠痘病毒（ECTV）呈阴性，并通过了支原体检测.

• 抗原表达: SP20细胞系表达H-2d抗原，这是小鼠的主要组织相容性复合体（MHC）抗原之一.

• 基因特征: 由于其不分泌免疫球蛋白的特性，SP20细胞系在基因水平上缺乏相关的免疫球蛋白基因表达，这使其在单克隆抗体生产中具有独特的优势

SP20细胞参数表

细胞名称	SP20细胞（Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞）
细胞别称	SP2/0-Ag14; SP2/0-AG14; SP2/0-ag14; Sp2/O-Ag14; SP2/O-Ag14; Sp2/0-Ag-14;SP2-0-Ag14; SP2/0 Ag-14; SP-2/0-AG14; Sp 2/0-Ag 14; Sp2/0; SP2/0; Sp2/O; SP2/O; SP-2;SP2;GM03569; GM03569B; GM3569
细胞类型	小鼠骨髓瘤细胞
物种	小鼠（Mus musculus）
来源	经过绵羊红细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞与P3X63Ag8骨髓瘤细胞融合
形态	淋巴母细胞样，悬浮生长
培养基	DMEM，10%胎牛血清（FBS），青霉素和链霉素
培养条件	37°C，95%空气，5%二氧化碳
传代	1:2至1:3，每周3次，传代时达80%-90%
抗原表达	H-2d
免疫球蛋白	不分泌
8-氮鸟嘌呤	对20μg/ml抗性
HAT	敏感
病毒检测	鼠痘病毒（ECTV）阴性
支原体检测	阴性
应用	单克隆抗体生产、细胞融合实验、抗体工程
复苏活力	存活率 > 90%
冻存温度	-196°C（液氮）
运输温度	-80°C（干冰）

Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞培养教程

细胞复苏

• 从液氮中取出冻存的SP20细胞，迅速放入37°C水浴中解冻。

• 将解冻的SP20细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中。

• 以1000rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用新鲜培养基重悬SP20细胞，并转移到培养瓶中。

• 将培养瓶置于37°C，5% CO2培养箱中培养。

细胞传代

• 传代比例：1:2至1:4；传代频率：每周2~3次

• 当SP20细胞密度达到80%-90%时进行传代。

• 收集细胞悬液，1000rpm离心5分钟。

• 弃去上清，用新鲜培养基重悬SP20细胞。

• 按照传代比例将SP20细胞分配到新的培养瓶中。

• 添加新鲜培养基至适当体积。

• 将培养瓶置于培养箱中继续培养。

换液

• 频率：每周2~3次

• 方法：更换50-70%的旧培养基为新鲜培养基。

细胞冻存

• 冻存液配方：55%基础培养基 + 40%FBS + 5%DMSO

• 收集对数生长期的SP20细胞。

• 以1000rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用冻存液重悬SP20细胞，调整密度至1-2×10^6个/ml。

• 将SP20细胞悬液分装到冻存管中。

• 将冻存管放入程序降温盒中，置于-80°C冰箱中缓慢降温。

• 24小时后转移到液氮中长期保存。

注意事项

• 定期检查SP20细胞形态和生长状况。

• 保持无菌操作，避免污染。

• 定期进行支原体检测。

• 细胞密度应保持在适当范围内，不宜过高或过低。

• 避免反复冻融SP20细胞，以防影响细胞活性。

SP20细胞的实验优势

• 单克隆抗体生产：由于不分泌免疫球蛋白，SP20细胞是制备杂交瘤和生产单克隆抗体的理想选择。

• 细胞融合实验：SP20细胞可以作为细胞融合中的B细胞组分，用于制备杂交瘤。

• 抗体工程：在抗体工程和改造中，SP20细胞可作为重要的工具细胞。

• 药物敏感性研究：SP20细胞对20μg/ml的8-氮鸟嘌呤有抗性，对HAT培养基敏感，可用于相关药物研究。

• 肿瘤学研究：作为骨髓瘤细胞模型，SP20细胞可用于评估新治疗方法和药物的有效性，以及研究浆细胞瘤的发生和发展机制。

• 基因转染和蛋白质表达：SP20细胞适用于基因转染和蛋白质表达的体外实验模型。