OP9细胞（小鼠骨髓基质细胞）

OP9细胞起源于新生的(C57BL/6 x C3H)F2 -op/op小鼠的颅盖骨。这种小鼠因M-CSF基因突变，无法生成功能性巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）。

OP9细胞的优势在于其不需要外源生长因子或复杂的胚胎结构即可实现共培养，从而为研究造血细胞的发育和分化机制提供了简便的系统。广泛应用在免疫学和干细胞研究，尤其是在探索体外诱导造血分化的过程。

OP9小鼠骨髓基质细胞特性特征

基因突变：OP9细胞小鼠因编码巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）基因中的突变，无法生成功能性M-CSF。
M-CSF缺失：OP9细胞缺乏功能性M-CSF的表达。M-CSF通常对胚胎干细胞（ES细胞）向非巨噬细胞血细胞的分化具有抑制作用，因此OP9细胞能够有效促进胚胎干细胞向红细胞、髓系细胞和B细胞谱系的分化。
共培养：OP9细胞可与小鼠胚胎干细胞共培养，诱导其分化为多种血细胞类型，包括红细胞、髓系细胞和B细胞。
研究价值：该细胞系的独特性使其成为研究造血细胞发育和分化机制的重要工具，尤其在免疫学和干细胞研究中具有广泛应用

细胞名称	OP9细胞（小鼠骨髓基质细胞）
别称	OP-9, OP9, 小鼠骨髓基质细胞
种属/品系	小鼠, (C57BL/6 x C3H)F2-op/op
组织来源	颅盖骨，骨髓基质；巨噬细胞来源的胚胎干细胞
形态生长	成纤维细胞样；贴壁生长
细胞代数	10代以内
倍增时间	~26小时
培养基	MEM-α + 20% 胎牛血清 + 1% 抗生素/抗真菌剂（P/S）
培养条件	95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37°C
传代密度	80%-90%汇合度；1:2
传代方法	0.25%胰蛋白酶消化
基因型	op/op
基因突变	M-CSF基因突变，无功能性M-CSF表达
主要用途	与小鼠ES细胞共培养，诱导造血分化
特点	缺乏M-CSF抑制作用，促进ES细胞向红细胞、髓系和B细胞分化
运输方式	活细胞：常温；冻存管：干冰
冻存条件	无血清冻存液，液氮储存
收货处理	收到后需在37°C培养箱中稳定2-4小时
生物安全	1级
微生物检测	支原体/细菌/真菌：无
保藏机构	ATCC, CRL-2749
供应限制	仅限于科学研究，不可用于治疗

洗涤：弃去培养基，使用无钙、无镁的PBS缓冲液洗涤OP9细胞1-2次，以去除残留物和浮游细胞。
消化：加入1 mL消化液（0.25%胰蛋白酶 + 0.02% EDTA），轻轻摇动，使消化液均匀覆盖OP9细胞。将培养瓶置于37°C培养箱中消化1-3分钟，期间密切观察OP9细胞的消化情况。
终止消化：当OP9细胞开始脱离培养瓶底部时，立即加入等体积的完全培养基以终止消化过程。
离心：将消化后的OP9细胞悬液转移至离心管，离心1000 rpm，持续5分钟。弃去上清，保留细胞沉淀。
重悬与接种：将细胞沉淀重悬于新鲜的完全培养基中，按照适当的密度接种到新的培养瓶中。

细胞密度管理：应保持OP9细胞密度在4 x 10³ ~ 1 x 10⁴ cells/cm²之间，以确保细胞最佳的生长状态。密度过高或过低均会影响OP9细胞的健康。
支原体检测：定期进行支原体检测，以防止支原体污染，影响OP9细胞的实验结果。
培养基更换：每3天更换一次培养基，确保OP9细胞有充足的营养供应和适宜的生长环境。