HL-1细胞系（小鼠心肌细胞系）

HL-1细胞系来源于成年雌性C57BL/6J小鼠的AT-1皮下肿瘤，该肿瘤由转基因小鼠产生，心房利钠因子(ANF)启动子驱动SV40大T抗原的表达。HL-1细胞是唯一能够维持心肌细胞表型的永生化小鼠心肌细胞系，具备持续分裂和自发收缩的能力，同时保持细胞形态、生化特性及电生理特征。尽管经过多次传代，HL-1细胞仍能保留其分化的心肌细胞表型。HL-1细胞系广泛应用于研究正常心肌细胞的信号传导、细胞电化学、代谢过程以及转录调节功能，并在研究缺氧、高血糖-高胰岛素血症、细胞凋亡和缺血再灌注损伤等病理条件下的心脏功能中发挥了重要作用。HL-1细胞长期保留其心肌特性，使其成为探索心脏功能与病理机制的理想模型。

HL-1细胞系特性特征

永生化：HL-1细胞系是一种永生化的小鼠心肌细胞系，能够持续分裂和自发收缩。
分化特征：HL-1细胞在培养过程中能够保持心脏表型，包括形态学、生化和电生理特性。
基因表达：HL-1细胞表达心脏特异性基因，如心房利钠因子(ANF)，以及与心脏功能相关的其他基因。
转基因特性：由于其来源于转基因小鼠，HL-1细胞中SV40大t抗原的表达使其具备了永生化的能力。
心脏标志物：HL-1细胞表达多种心脏特异性蛋白，例如肌动蛋白、心肌肌钙蛋白等，这些蛋白质在心脏收缩和电生理活动中起重要作用。

HL-1细胞系参数表

细胞名称	HL-1细胞系（小鼠心肌细胞系）
细胞别称	HL1; HL-1 F2 P76
种属来源	小鼠
组织来源	心脏
细胞形态	成纤维细胞样
细胞类型	转化细胞
生长特性	贴壁生长
培养基	HL-1细胞专用培养基
气相条件	95%空气 + 5% CO₂
培养温度	37°C
传代方法	1:2至1:3，每周3次
细胞密度	80%-90%时进行传代
冻存条件	冻存液：55%基础培养基+40% FBS+5% DMSO 温度：液氮
支原体检测	无
纯度规格	1×10⁶活细胞/mL
细胞生长状态	一般在传代后48小时内检查细胞密度和状态
细胞活力	细胞复苏后需在24小时内观察细胞活力
细胞计数方法	使用血球计数板或自动细胞计数仪
注意事项	定期检查细胞状态，避免污染

培养教程

HL-1小鼠心肌细胞系培养教程

细胞复苏

将含有1 mL HL1细胞悬液的冻存管从液氮中取出后，迅速置于37°C的水浴中，轻轻摇动，使HL1细胞迅速解冻。
解冻后，立即将HL1细胞悬液转移到含有9 mL预温至37°C的培养基的无菌离心管中，轻轻混合均匀。
在1000 rpm条件下离心3-5分钟，弃去上清液，用1-2 mL新鲜培养基重悬HL1细胞。
将HL1细胞悬液转移至含适量培养基的培养瓶中，并置于37°C、5% CO₂培养箱中培养过夜。
第二天，检查HL1细胞状态并更换新鲜培养基，以确保HL1细胞处于良好生长状态。

细胞传代

当HL1细胞覆盖面积达到80%时，准备进行传代培养。
小心弃去培养瓶中的培养上清液，用无钙、镁离子的PBS缓冲液清洗HL1细胞1-2次，以去除残留的培养基成分。
向培养瓶中加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA消化液，并将培养瓶放置于37°C培养箱中，消化1-3分钟。
在显微镜下观察HL1细胞的消化状态，待大部分HL1细胞变圆且开始脱落时，迅速将培养瓶取出。轻轻敲击培养瓶几下，加入2-3 mL完全培养基终止消化反应。
将HL1细胞悬液轻轻混匀后，转移至无菌离心管中，在1000 rpm下离心5分钟，弃去上清液。
用1-2 mL新鲜培养基重悬HL1细胞，并按1:2的比例将HL1细胞分装到新的培养瓶或培养皿中，加入培养基后，将培养瓶放回培养箱中继续培养。

细胞冻存

收集HL1细胞和培养液，转移至无菌离心管中，以1000 rpm离心4分钟，弃去上清液。
用PBS缓冲液清洗HL1细胞一次，随后弃去PBS，进行细胞计数。
根据HL1细胞数量，加入无血清的细胞冻存液，使HL1细胞密度达到1-3×10⁶/mL，轻轻混匀。
将1 mL HL1细胞悬液分装至已标识好的冻存管中。
将冻存管置于-80°C冰箱中进行初步冷冻，24小时后转移至液氮罐中长期保存，并记录冻存管的位置以便日后取用。