C2C12细胞（小鼠成肌细胞）

C2C12细胞系是具有持续增殖和分化潜能的小鼠细胞亚克隆，源于1977年由以色列魏茨曼科学研究所的D. Yaffe和O. Saxel从正常C3H小鼠的股骨肌肉中提取。C2C12细胞是在小鼠遭受压碎性损伤后的肌肉组织中分离。

C2C12细胞不携带鼠痘病毒染色体数在69至77之间。C2C12细胞系具有贴壁生长的特性，呈现放射状的细胞形态，并由许多沿多个方向延伸的长纤维构成。在高血清条件下，C2C12细胞能够迅速增殖；在低血清条件下，它们能够分化为肌母细胞，并进一步融合形成多核肌管，表现出特征性的肌肉蛋白表达。因此，C2C12细胞成为研究肌肉发育和分化的重要模型。

C2C12细胞特性特征

c2c12细胞在低血清条件下会分化成肌肉束,形成可收缩的肌管
c2c12细胞能够快速分化为表达特征性肌蛋白的肌管
用骨形成蛋白2(BMP-2)处理可使其分化途径从成肌细胞转向成骨细胞
c2c12细胞经检测鼠痘病毒呈阴性
应用特点：c2c12细胞是一种理想的转染宿主、可用于3D细胞培养、是研究肌肉发育、分化及相关机制的重要模型

C2C12细胞参数表

细胞名称	C2C12细胞（小鼠成肌细胞）
别名	C2c12; C2-C12; C12
来源	小鼠C3H大腿肌肉（1977年，魏茨曼科学研究所）
细胞类型	自发永生化细胞
细胞形态	成肌细胞样
染色体数	69-77
生物安全等级	1
生长特性	贴壁型细胞
倍增时间	12-24小时
培养基	DMEM + 10% FBS + 1% P/S
推荐传代比例	1:3 - 1:4
推荐换液频率	2-3次/周
播种密度	1 x 10⁴ cells/cm²
气相/温度	95%空气 + 5% CO₂ / 37°C
细胞外酸化率	可用于评估细胞代谢和线粒体功能
冻存液	55%基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO；液氮
冻存建议	采用缓慢冷冻方法，每分钟降低1°C
分化潜能	能够分化为肌母细胞，形成多核肌管，表达特征性肌蛋白
特殊处理	用BMP-2处理可使分化途径转变为成骨细胞
细胞转染宿主	是
细胞检测	鼠痘病毒检测呈阴性
细胞存储机构	ATCC; CRL-1772; BCRC 60083; BCRJ 0058; DSMZ ACC-565
细胞特征	细胞在低血清条件下可分化为肌肉束，形成可收缩的肌管
代谢底物吸收	能吸收氧、葡萄糖、脂肪酸、谷氨酰胺等

培养教程

C2C12小鼠成肌细胞培养教程

细胞复苏

将冻存的C2C12细胞管从液氮罐中取出，迅速放入37°C水浴中复苏，直至管内仅残留少量冰块。
将复苏的C2C12细胞悬液转移至预热的完全培养基中（DMEM + 10% FBS + 1% P/S），轻轻吹打均匀以混匀。
将C2C12细胞悬液转移到15 mL离心管中，缓慢加入5 mL预热的培养基。
在1000 rpm下离心5分钟，弃去上清液，用5 mL预热的培养基重悬C2C12细胞。

细胞播种

将重悬的C2C12细胞接种到已用培养基湿润的培养瓶中，播种密度设为1×10⁴ cells/cm²。
轻轻摇动培养瓶，使C2C12细胞均匀分布。
将培养瓶置于37°C、5% CO₂的培养箱中培养。

细胞传代

当C2C12细胞达到80-90%的汇合度时，进行传代操作。
弃去旧培养基，用预热的PBS轻轻冲洗C2C12细胞1-2次。
添加适量预热的传代酶（如Accutase），在37°C下孵育2-3分钟。
轻轻吹打以促使C2C12细胞脱离培养瓶底。
加入2-3倍体积的完全培养基以终止酶的活性。
将C2C12细胞悬液转移到离心管中，1000 rpm离心5分钟。
弃去上清液，用预热的培养基重悬C2C12细胞，并按1:3至1:4的比例接种至新的培养瓶中。
将新接种的培养瓶放入37°C、5% CO₂的培养箱中继续培养。

细胞培养

每2-3天更换一次培养基，以保持C2C12细胞在对数生长期。
定期观察C2C12细胞的生长情况，确保其处于最佳生长状态。
当C2C12细胞达到所需密度或分化程度时，即可进行相关实验或处理。