TM4细胞系是从雄性小鼠的睾丸中分离出的正常Sertoli细胞，广泛应用于生物医学研究。该细胞系来源于11至13日龄的小鼠睾丸，属于Sertoli细胞类型，呈上皮样形态，能够贴壁生长。TM4细胞对FSH刺激有反应，可增加cAMP的产生，但对黄体生成素（LH）无反应。与原代培养的支持细胞相比，TM4细胞的FSH反应性显著降低。虽然TM4细胞系产生的组成型纤溶酶原激活物较少，但在FSH和视黄酸的刺激下，其产量显著增加。

TM4细胞特性特征

• TM4细胞表达FSH受体、雄激素受体和孕激素受体；表达视黄醇结合蛋白、组织纤溶酶原激活物和转铁蛋白

• TM4细胞对FSH有反应，cAMP产量增加，但对LH无反应

• TM4细胞组成型纤溶酶原激活物产量低，但可被FSH和维甲酸刺激增高

• TM4细胞在其抗原表达谱中，包括了H-Y抗原和一种与“小肌肉”相关的蛋白质

• TM4细胞在免疫抑制小鼠中未显示致瘤性，但能在半固体培养基中形成集落

• TM4细胞检测鼠痘病毒呈阴性

TM4细胞参数表

TM4小鼠正常睾丸Sertoli细胞培养教程

TM4细胞复苏

• 准备好DMEM/F12培养基，加入5%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（P/S）以提供基础营养和抗菌保护。

• 在水浴中将培养基预热至37℃，为TM4细胞复苏提供适宜的环境。

• 从液氮中取出冻存的TM4细胞管，迅速放入37℃的水浴中解冻，过程中轻轻摇晃冻存管，使TM4细胞快速融化，一般在1分钟内完成。

• 解冻后立即将TM4细胞悬液转移到含5 mL预热培养基的离心管中，轻轻混匀，以稀释DMSO并保护TM4细胞。

• 在1000 RPM下离心5分钟，去除上清液中的DMSO和其他可能的毒性物质。

• 向TM4细胞沉淀中加入4-6 mL预热的完全培养基，轻轻吹匀TM4细胞，使其均匀悬浮。

• 将TM4细胞悬液转移到培养瓶中，置于37℃、5% CO2的培养箱中过夜培养，使TM4细胞适应新的环境并贴壁生长。

TM4细胞传代

• 观察TM4细胞的形态和密度，当细胞汇合度达到80%-90%时，可以进行传代操作。

• 小心弃去旧的培养基，用无钙镁的PBS缓冲液洗涤TM4细胞1-2次，去除残留的血清和代谢废物。

• 加入1-2 mL 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，置于37℃的培养箱中消化1-2分钟。观察TM4细胞形态，当大部分TM4细胞变圆并脱落时，轻轻敲击培养瓶的侧面以帮助TM4细胞脱离。

• 立即加入含10% FBS的完全培养基终止消化，并将TM4细胞悬液吹打均匀。

• 吸出TM4细胞悬液，在1000 RPM下离心8-10分钟，去除上清液。

• 加入1-2 mL完全培养基轻轻吹匀TM4细胞，将其按1:2至1:5的比例分配到新的培养瓶中，并补充5-6 mL新鲜培养基。

TM4细胞培养注意事项

• 若发现TM4细胞在培养瓶中漂浮，需检查培养环境是否适宜，确保培养瓶密封良好，瓶口需使用70%乙醇消毒后平稳放置。

• 定期检查TM4细胞是否有污染，确保支原体、细菌、酵母和真菌检测结果为阴性。

• TM4细胞复苏后三天内，定期拍照记录TM4细胞状态，以便于观察TM4细胞的生长状况和追踪任何异常。

• 当TM4细胞生长状态良好时，可进行TM4细胞冻存，使用无血清冻存液，将TM4细胞储存于液氮中以备后续使用。