H22细胞（小鼠肝癌细胞）

H22细胞系最早由前苏联医学科学院肿瘤研究所于1952年通过在C3HA小鼠中诱导肝癌形成实体瘤后建立。随后，该瘤细胞悬液经过皮下移植至昆明种小鼠，最终转化为腹水瘤。这些细胞经过多次传代后，能够在多种小鼠品系中（如Km小鼠、615小鼠、C57BL/6小鼠和BALB/C小鼠）形成实体瘤和腹水瘤。后来，H22细胞系由大连医科大学从小鼠腹水中进一步分离并推广。

H22细胞（小鼠肝癌细胞）参数表

细胞名称	H22细胞（小鼠肝癌细胞）
别称	Hepatoma-22; Hepatoma22; h-22
物种	小鼠（Mus musculus）
组织来源	肝脏，肝癌
细胞形态	淋巴母细胞样，呈圆形
生长特性	悬浮生长
来源	由前苏联医学科学院肿瘤研究所于1952年建立，通过C3HA小鼠诱发肝癌获得，后在昆明种小鼠中转化为腹水瘤
培养基	RPMI-1640 + 10% 胎牛血清 (FBS) + 1% 青霉素-链霉素
接种密度	3×10^5 - 5×10^5 cells/mL
换液频率	每2-3天更换一次培养基
培养条件	37°C，95% 空气 + 5% CO2
冻存液	55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO
生物安全等级	BSL 1
传代次数	通常在4-5代内使用，之后细胞活力可能下降
表面标志物	可能表达CD44、CD24等与肿瘤相关的抗原
增殖指数	高增殖能力，细胞周期调控与肿瘤发生相关
基因组特征	可能包含与肝脏代谢、细胞增殖和凋亡相关的基因突变
转录组特征	可能显示与肝癌相关的特定基因表达上调
研究领域	肝癌基础研究、药物筛选、肿瘤生物学研究
主要用途	评估抗肿瘤药物效果、探索生物标志物

培养教程

H22小鼠肝癌细胞培养教程

H22细胞复苏步骤

从液氮中取出冻存的H22细胞，迅速置于37°C水浴中，轻轻摇动，直至H22细胞完全解冻（约1-2分钟）。
将解冻的H22细胞悬液转移至10 mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀。
以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。
将H22细胞重悬于5 mL完全培养基中，混匀后接种至培养瓶中，接种密度为3×10^5 - 5×10^5 cells/mL。

H22细胞的换液与传代

换液频率：每2-3天更换一次培养基，以保持H22细胞的最佳生长环境。
当H22细胞生长至70%-80%汇合时，开始传代。
用PBS轻柔洗涤H22细胞，去除残留培养基。
加入1-2 mL胰酶，消化H22细胞，持续观察H22细胞脱落情况，通常需要1-2分钟。
加入等体积的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀。
以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。
将H22细胞重悬于适量的完全培养基中，并以接种密度为3×10^5 - 5×10^5 cells/mL接种至新的培养瓶中。

H22细胞冻存步骤

选取对数生长期的H22细胞，收集后离心去除培养基。
用55%基础培养基、40% FBS和5% DMSO的冻存液重悬H22细胞。
将H22细胞分装入冻存管中，逐步冷冻：先置于-80°C冰箱过夜，次日转移至液氮中长期保存。

注意事项

悬浮细胞处理：H22细胞为悬浮生长，收集时应注意保留所有培养液，以免损失H22细胞。
传代次数控制：H22细胞在体外传代4-5代后可能活力下降，可通过腹水培养恢复其活力。
无菌操作：整个操作过程应严格无菌，以避免污染。

H22细胞的收集和离心方法

设备无菌：确保所有离心管、培养基和其他操作工具均为无菌状态。
H22细胞收集：将培养瓶中的H22细胞悬液轻轻混匀，确保H22细胞均匀分布。
离心操作：将H22细胞悬液转移至无菌离心管，1000 rpm离心8-10分钟。
去除上清液：小心去除上清液，保留H22细胞沉淀。
重悬H22细胞：加入适量完全培养基，轻轻吹打混匀，进行接种或冻存。

通过腹水培养恢复H22细胞活力

实验小鼠准备：选择健康的昆明种小鼠进行实验。
腹水诱导：将H22细胞悬液注射至小鼠腹腔中，通常注射量为1×10^6 cells/mL。
腹水收集：注射后3-7天，通过腹腔穿刺收集腹水液体。
H22细胞分离：收集的腹水液体离心1000 rpm，5-10分钟，去除上清液，保留H22细胞沉淀。
重悬和培养H22细胞：用完全培养基重悬H22细胞，并接种至新的培养瓶中继续培养。