STO小鼠胚胎成纤维细胞是一种从SIM小鼠胚胎中分离的细胞系，由拿大多伦多安大略癌症研究所建立。作为一种继代生长的胚胎成纤维细胞系，STO细胞主要应用于制备饲养层细胞和其他研究。STO细胞具有成纤维细胞的形态特征，并在贴壁条件下生长。

STO细胞特性特征

• 抗性特征: STO细胞选择对6-硫鸟嘌呤和哇巴因具有抗性的群体，这些群体对HAT培养基敏感，并且HPRT阴性。

• 细胞检测: STO细胞已测试对小鼠痘病毒呈阴性。

• 长期传代现象: 在体外若经长期连续传代，STO细胞常会产生胞质空泡

应用

• 饲养层细胞: 常用于制备经过辐照或丝裂霉素C处理的饲养层细胞，以维持储备畸胎瘤干细胞的未分化状态。

• 实验室研究: 广泛应用于干细胞研究和其他生物医学研究。

STO细胞参数表

STO小鼠胚成纤维细胞系培养教程

细胞复苏

• 解冻STO细胞: 在37℃水浴中快速解冻含有1 mL细胞悬液的冻存管，持续摇晃以加速解冻过程。

• 加入培养基: 解冻后立即向冻存管中加入4 mL培养基，轻轻混合均匀。

• 离心处理: 在1000 rpm条件下离心3分钟，弃去上清液。

• 重悬STO细胞: 加入1-2 mL培养基，轻轻吹打使STO细胞均匀悬浮。

• 培养过夜: 将STO细胞悬液转移至含有适量培养基的培养瓶中，或者6 cm培养皿中（加入约4 mL完全培养基），培养过夜。

细胞传代

• 观察STO细胞密度: 在第三天进行换液并检查STO细胞密度。

• 确定传代时机: 当STO细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代。

• 清洗STO细胞: 弃去培养液，用PBS清洗STO细胞一次。

• 消化STO细胞: 添加约1 mL的0.25%胰蛋白酶消化液，观察STO细胞回缩变圆。

• 终止消化: 加入完全培养液终止消化，轻轻吹打STO细胞使其脱落。

• 离心与重悬: 将STO细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃去上清，沉淀STO细胞用12 mL完全培养基重悬。

• 分瓶传代: 按1:2比例进行分瓶传代，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养STO细胞。

• 观察与换液: 待STO细胞完全贴壁后，观察培养结果，并根据需要进行换液或再次传代。

冻存与复苏

• 冻存条件: 使用55%基础培养基+40% FBS+5% DMSO，储存在液氮中。

• 复苏方法: 在37℃水浴中快速解冻STO细胞，离心去上清，重悬后进行培养。

细节注意事项

• 无菌操作: 确保所有操作在无菌环境下进行，以避免STO细胞污染。

• 培养基使用: 使用优化的STO细胞专用培养基，该培养基已经包含了STO细胞生长所需的各种成分，无需额外添加血清和抗生素。

• 消化与传代: 在传代时，使用0.25%胰蛋白酶消化液，观察STO细胞回缩变圆后立即终止消化，以防止STO细胞过度消化。避免过度传代，保持适当的传代比例（如1:2或1:3），并在STO细胞密度达到80%-90%时进行传代。

• 培养条件: 维持培养环境的稳定，气相为95%空气和5% CO2，温度为37℃。定期换液，通常在第三天换液并检查STO细胞密度。

• 减少胞质空泡产生: 控制传代频率，避免长期连续传代。确保培养基的新鲜和适当的营养成分，避免营养缺乏。观察STO细胞状态，及时调整培养条件以减少应激反应。