MB49细胞源自C57BL/Icrf-a(t)小鼠膀胱上皮细胞，经过7,12-二甲基苯并[a]蒽（DMBA）单次24小时处理后转化而来。

MB49细胞特性特征

• 遗传特征：MB49细胞虽源自雄性小鼠，但100%的细胞中Y染色体丢失，这种异常在人类膀胱癌早期培养中也常见

• 肿瘤形成能力：MB49细胞移植到同基因小鼠中能产生癌症、在小鼠中植入后，雄性小鼠的肿瘤明显大于雌性小鼠，体现了膀胱肿瘤生长的性别差异

• 激素反应性：对二氢睾酮(DHT)敏感，MB49细胞表现出剂量依赖的增殖增强、对妊娠激素和人绒毛膜促性腺激素(hCG)无反应

• 免疫相关特征：MHC I类和II类分子表达低或无表达、经IFN-gamma处理后，MHC I类和II类分子表达显著上调

MB49细胞参数表

MB49小鼠膀胱癌细胞培养教程

MB49细胞复苏

• 从液氮罐中取出冻存管，立即放入37°C水浴中轻轻摇晃解冻，时间为1-2分钟，直至完全解冻。

• 用75%酒精擦拭MB49细胞冻存管外表面，确保无菌操作。

• 将解冻后的MB49细胞悬液转移到离心管中，加入4mL预热的培养基（DMEM + 10% FBS + 1% P/S），混合均匀。

• 以1000 rpm离心3-4分钟，弃去上清液。

• 加入1-2mL培养基重悬MB49细胞，轻轻吹打混匀。

• 将MB49细胞悬液转移到T25培养瓶中，加入适量的培养基（总量10-12mL），置于37°C、5% CO2培养箱中过夜培养。

• 第二天换液，检查MB49细胞密度和状态，确保细胞良好贴壁生长。

MB49细胞传代

• 传代密度：当MB49细胞密度达80%-90%时进行传代。

• 建议按1:2至1:4比例传代，具体取决于MB49细胞的生长速度及密度。

• 弃去培养上清，用无钙、无镁的PBS润洗MB49细胞1-2次。

• 加入1mL消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液均匀覆盖所有MB49细胞。

• 弃去消化液，将培养瓶置于37°C培养箱中消化1-2分钟，观察MB49细胞消化情况，当细胞大部分变圆并脱落时，迅速取出。

• 轻敲几下培养瓶，加入少量培养基终止消化。

• 按6-8mL/瓶补加培养基，轻轻混匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4分钟，弃去上清液。

• 补加1-2mL培养基重悬MB49细胞，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的培养瓶中，置于培养箱中继续培养。

MB49细胞冻存

• 准备工作：当MB49细胞生长状态良好时，可以进行细胞冻存。

• 弃去培养基，用PBS清洗MB49细胞一次，加入1mL胰酶消化，细胞变圆脱落后，加入1mL含血清的培养基终止消化。

• 使用血球计数板计数MB49细胞，4分钟1000 rpm离心去除上清。

• 加入1mL血清重悬MB49细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，确保DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10^6/ml。

• 每支冻存管冻存1mL MB49细胞悬液，并做好标识。

• 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱预冻2小时后转入液氮罐长期保存。