661W细胞系来源于雄性C57BL/6N转基因小鼠的视网膜组织，属于视网膜神经节细胞类型，并带有SV40病毒基因。661W感光细胞系由视网膜锥细胞转化而成，具备视锥细胞的标记物，是研究视网膜及睫状体疾病的有效细胞模型。

661W细胞特性特征

• 转基因特性: 携带SV40基因，这是使661W细胞永生化的关键因素。

• 视锥细胞标记: 661W细胞表达视锥细胞特有的分子标记，使其成为研究视网膜光感受器的理想模型。

• 光感受性: 661W细胞作为视网膜感光细胞，对光刺激有反应。

• 低氧敏感性: 661W细胞在低氧条件下会发生时间依赖性死亡。

661W小鼠视网膜神经节细胞参数表

661W小鼠视网膜神经节细胞培养教程

传代步骤

• 吸干T25瓶中的原培养基。

• 用3-4ml常温PBS轻轻冲洗661W细胞10-20秒，随后吸走PBS。

• 加入约1ml胰酶，轻轻晃动培养瓶使胰酶均匀覆盖在661W细胞层上。

• 将培养瓶放入37℃培养箱中消化，观察661W细胞间隙变化。

• 当细胞间隙增大但未完全脱落时，加入2-3ml完全培养基终止消化。

• 将661W细胞悬液混匀，900rpm离心3-5分钟，弃上清液。

• 用新鲜完全培养基轻轻重悬661W细胞，均匀分配至新培养瓶中。

• 补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱中继续培养661W细胞。

冻存方法

• 冻存液配方: 92% FBS + 8% DMSO（推荐给新手）或92%完全培养基 + 8% DMSO（推荐给有经验者）

• 冻存规格: 200-300万661W细胞/ml，1ml每管

• 消化并离心后，加入配制好的冻存液轻轻重悬661W细胞。

• 将661W细胞悬液迅速转移至标记好的冻存管中。

• 将冻存管放入程序冻存盒中，置于-80℃冰箱过夜，次日转入液氮中保存。

• 若无程序冻存盒，可将冻存管放在泡沫盒中于4℃静置5-10分钟，再于-20℃静置2小时后转入-80℃冰箱过夜，次日转入液氮保存。

注意事项

• 消化控制: 不同品牌的胰酶消化时间差异较大，需严格控制消化时间以避免对661W细胞的过度损伤。

• 操作要求: 传代操作时需轻柔，避免产生过多气泡。

• 质量控制: 冻存后应及时复苏一管661W细胞以检查细胞活性，并定期监测661W细胞状态以确保其未发生变异或污染。

• 实验设计: 由于661W细胞对低氧条件的敏感性，设计相关实验时需考虑低氧对661W细胞生物学特性的影响。

低氧条件下的生长特性

• 基因表达和信号通路:低氧条件下（1% O2和5% CO2）与常氧条件下（5% CO2）相比，661W细胞的基因表达和信号通路发生显著变化。筛选出506个显著差异表达基因，其中459个基因上调，47个基因下调。主要涉及细胞对低氧反应、糖酵解、细胞增生负调控及凋亡等过程。

• 主要信号通路包括糖酵解、糖异生、果糖代谢、磷酸戊糖途径、HIF-1α、FoxO、胰岛素及AMPK信号通路。

• 关键低氧相关基因包括Aldoa、Aldoc、Gpi1、Hk2、Hk1、Pfkl、Pfkp、Vhl、Fbxo10、Fbxo27，以及Ndrg1、Mt1和VEGFA的mRNA表达水平呈低氧时间依赖性变化。

  
  

• 细胞行为

• 凋亡: 低氧条件下，661W细胞的凋亡率显著增加。

• 自噬: 缺氧后自噬水平升高，8小时后达到峰值。

• 糖代谢: 低氧条件下，糖酵解相关基因显著上调，表明661W细胞通过增强糖酵解途径应对低氧环境。

传代比例下的表现

• 传代比例影响:

• 1:2: 适用于661W细胞生长较快的情况，细胞密度适中，生长状态良好。

• 1:4: 适用于661W细胞生长较慢的情况，传代比例较高时细胞密度较低，可能需要更长时间达到适宜的细胞密度。

  
  

  
  

• 注意事项:

• 不同品牌胰酶消化时间差异较大，需严格控制消化时间。

• 传代时需轻柔操作，避免产生气泡。

• 定期监测661W细胞生长状态，确保细胞未发生变异或污染。