RKO-AS45-1是一种人结肠癌转基因细胞系，由RKO结肠癌细胞通过转染人GADD45 cDNA开放阅读框到表达载体pCMV.3后建立。

RKO-AS45-1人结肠癌转基因细胞特性特征

• 含有稳定整合的巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的GADD45a表达载体、过度表达Gadd45 RNA和蛋白质.

• p53基因呈阳性(p53+)，但表达不足；GADD45基因受p53调控.

• GADD45蛋白表达水平高于母系RKO细胞.

• DNA修复能力降低，特别是对紫外线诱导的DNA损伤的修复能力减弱.

• GADD45蛋白与参与细胞周期调控和DNA修复的蛋白质相互作用

• RKO-AS45-1细胞系可与其亲本细胞系RKO一起用于研究GADD45在DNA修复、细胞凋亡和药物敏感性方面的影响。

RKO-AS45-1人结肠癌转基因细胞参数表

RKO-AS45-1人结肠癌转基因细胞培养教程

细胞复苏

• 预热培养基至37°C。

• 准备好含有培养基的培养瓶（T25或T75瓶）。

• 从液氮中取出冻存的rkoas451细胞管，迅速放入37°C水浴中摇动解冻，约1-2分钟。

• 解冻后立即用75%酒精擦拭细胞管外表面，转移至无菌操作台。

• 用1 ml预热的培养基缓慢加入rkoas451细胞管中，轻轻混匀。

• 将rkoas451细胞悬液转移到含有5 ml预热培养基的培养瓶中。

• 置于37°C，5% CO2培养箱中培养，24小时后换液。

细胞传代

• 预热培养基至37°C。

• 准备好新的培养瓶。

• 吸弃旧培养基，用PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤rkoas451细胞一次。

• 加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C消化2-5分钟，直至rkoas451细胞脱落。

• 加入2-3倍体积的培养基终止消化，轻轻吹打细胞，使rkoas451细胞完全悬浮。

• 按1:3或1:4的比例将rkoas451细胞悬液分装到新的培养瓶中。

• 加入适量预热的培养基，置于37°C，5% CO2培养箱中继续培养。

细胞冻存

• 预热培养基至37°C。

• 准备冻存管和冻存液（55%基础培养基，40%FBS，5%DMSO）。

• 按上述步骤消化并收集rkoas451细胞。

• 细胞悬液离心，1000 rpm，5分钟，弃上清。

• 重悬rkoas451细胞于预冷的冻存液中，细胞浓度为1x10^6 cells/ml。

• 将rkoas451细胞悬液分装到冻存管中，每管1 ml。

• 逐步降温：先置于-80°C冰箱中过夜，然后转移到液氮中长期保存。

其他注意事项

• 支原体检测: 每次传代前后应进行支原体检测，确保rkoas451细胞无污染。

• STR鉴定: 定期进行rkoas451细胞STR鉴定，确认细胞系的身份和纯度。

• 细胞观察: 每天观察rkoas451细胞生长状态，及时换液和传代，避免细胞过度融合。