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您的当前位置:首页 > 产品信息 > 小鼠细胞系 > L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞
产品名称:L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞
产品详细说明
  • 来源:皮下结缔组织;疏松结缔组织及脂肪
  • 细胞特征:贴壁细胞, 成纤维细胞样
  • 培养基:DMEM+0.4mg/ml G418+10% FBS+1% P/S
  • 其他:L Wnt-3A细胞因其能够分泌具有生物活性的Wnt-3A蛋白,成为生产Wnt-3A条件培养基的最佳来源

L Wnt-3A细胞是一种来源于小鼠皮下结缔组织的细胞系,具有成纤维细胞样形态。L Wnt-3A细胞从100日龄雄性小鼠的乳晕脂肪组织中分离出来,并经过特定基因修饰以表达Wnt-3A基因。L Wnt-3A细胞因其能够分泌具有生物活性的Wnt-3A蛋白,成为生产Wnt-3A条件培养基的最佳来源。

L Wnt-3A细胞系是通过在L-M(TK-)细胞中转染Wnt-3A表达载体并使用G418筛选出稳转株而获得。L Wnt-3A细胞属于小鼠C3H/An品系。由于Wnt-3A条件培养基除了含有Wnt-3A蛋白外,还包含其他因子,因此在相关实验中必须使用来自亲本细胞系的对照条件培养基,以确保实验结果的准确性。

L Wnt-3A皮下结缔组织细胞特性特征

  • Wnt-3A蛋白分泌:L Wnt-3A细胞能分泌具有生物活性的Wnt-3A蛋白。

  • 糖蛋白性质:Wnt-3A是一种分泌性糖蛋白,具有多种信号功能。

  • Wnt-3A基因表达:这些细胞稳定表达Wnt-3A基因。

  • 基因功能:Wnt-3A基因编码的蛋白在胚胎发育过程中控制多种模式形成和生长事件。

  • 稳定表达:L Wnt-3A细胞是通过转染Wnt-3A表达载体并在含G418的培养基中筛选出的稳转株,因此能持续稳定地表达Wnt-3A。

  • 条件培养基产生:这些细胞是生产Wnt-3A条件培养基的最佳来源

L Wnt-3A细胞参数表

细胞名称 L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞
细胞别称 L-Wnt-3A; L-Wnt3A; LWnt3A; LWnt-3A
来源 小鼠皮下结缔组织,C3H/An品系
具体组织 疏松结缔组织及脂肪
形态 成纤维样,贴壁细胞
细胞数量 >1x10^6 细胞
包装规格 T25培养瓶或1mL冻存管
用途 仅供科研使用
基因表达 Wnt-3A
基因功能 编码具有变异信号功效的分泌性糖蛋白,控制胚胎发育过程中的模式形成和生长事件
培养基 含G418的完全培养基
培养条件 37℃,5% CO₂环境
传代密度 70%-80%时进行传代
传代比例 第一次传代建议1:2
复苏步骤 75%酒精消毒,37℃培养箱放置2-3小时
干冰运输 1mL冻存管包装干冰运输,-80℃保存过夜后转入液氮或直接复苏
常温运输 T25瓶复苏的存活细胞常温发货
长期保存 液氮中保存
细胞特性 分泌生物活性Wnt-3A蛋白
条件培养基 生产Wnt-3A条件培养基的最佳来源,包含其他因子
实验对照 使用来源细胞株作对照

培养教程

L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞培养教程

L Wnt-3A细胞复苏

  • 从液氮中取出L Wnt-3A细胞冻存管,迅速放入37℃的水浴中,轻轻摇动1-2分钟,直至细胞完全融化。

  • 将L Wnt-3A细胞悬液转移到含10 mL预热完全培养基的15 mL离心管中。

  • 在1000 rpm下离心5分钟,弃去上清。

  • 用5 mL完全培养基重悬L Wnt-3A细胞。

  • 将细胞悬液转移至T25培养瓶中,放入37℃,5% CO₂培养箱中培养L Wnt-3A细胞。

日常培养

  • 每1-2天观察L Wnt-3A细胞的生长状况,根据生长速度决定换液频率。

  • 通常每2-3天更换一次L Wnt-3A细胞的培养基。

  • 弃去旧培养基后,用PBS轻轻冲洗L Wnt-3A细胞1-2次。

  • 加入新鲜预热的完全培养基。

L Wnt-3A细胞传代

  • 当L Wnt-3A细胞密度达到70%-80%时进行传代:

  • 弃去培养基,用PBS轻轻冲洗L Wnt-3A细胞1-2次。

  • 加入适量0.25%胰酶-EDTA溶液,37℃孵育1-2分钟。

  • 在显微镜下观察,当L Wnt-3A细胞变圆并开始脱落时,轻拍培养瓶。

  • 加入等体积含血清的培养基终止消化。

  • 将L Wnt-3A细胞悬液转移至15 mL离心管中,1000 rpm离心5分钟。

  • 弃去上清,用新鲜培养基重悬L Wnt-3A细胞。

  • 按1:2或1:3的比例将L Wnt-3A细胞接种到新的培养瓶中。

L Wnt-3A细胞冻存

  • 收集对数生长期的L Wnt-3A细胞。

  • 按传代方法收集L Wnt-3A细胞。

  • 用冻存培养基(含10% DMSO)重悬L Wnt-3A细胞,调整细胞密度至1-2×10^6/mL。

  • 将L Wnt-3A细胞悬液分装至冻存管中,每管1 mL。

  • 将冻存管放入程序降温盒中,置于-80℃冰箱中过夜。

  • 次日将L Wnt-3A细胞冻存管转入液氮中长期保存。

Wnt-3A条件培养基制备

  • 培养L Wnt-3A细胞:使用含G418的完全培养基在37℃,5% CO₂环境下培养L Wnt-3A细胞。

  • 收集培养基:当L Wnt-3A细胞达到70-80%汇合度时,更换为新鲜的完全培养基。

  • 分泌期:继续培养3-4天,以便L Wnt-3A细胞分泌Wnt-3A蛋白到培养基中。

  • 收集和处理:收集L Wnt-3A细胞的培养基,并通过离心或过滤去除细胞碎片。

  • 浓缩和储存:收集的L Wnt-3A细胞培养基可以直接使用或进行浓缩处理;分装后在-20℃或-80℃储存备用。

  • 质量控制:测试Wnt-3A的活性,确保L Wnt-3A细胞培养基中含有生物活性Wnt-3A蛋白。

注意事项

  • 收到L Wnt-3A细胞后,首次传代建议在T25培养瓶中以1:2的比例传代。

  • 运输用的培养基不应再用于培养L Wnt-3A细胞,需使用新配制的完全培养基。

  • 如果因运输振动导致L Wnt-3A细胞脱落,需要离心回收。

  • 定期检查L Wnt-3A细胞是否有污染或形态异常。

  • 所有操作应在生物安全柜中进行,以确保无菌操作。

  • Wnt-3A条件培养基中含有其他因子,在实验中建议使用亲本细胞株(ATCC CRL-2648)作为对照。

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