MLOY4细胞（小鼠骨样细胞系）

MLO-Y4小鼠骨样细胞系是由Lynda F. Bonewald教授团队于1997年在美国德克萨斯大学卫生科学中心建立。MLOY4细胞系是通过从14日龄的（C57BL/6J x BALB/cJ）F2 Bgla启动子T-Ag转基因小鼠中分离骨细胞，然后通过SV40大T抗原的表达进行永生化而得到的。
MLO-Y4细胞与原代骨细胞在性质上非常相似，但与成骨细胞不同。MLOY4细胞具有显著的骨细胞特性。

MLOY4细胞呈现典型的树突状形态，与体内骨细胞相似、产生广泛、复杂的树突突起、上皮细胞样形态，贴壁生长。

MLOY4小鼠骨样细胞系特性特征

分子和表达特征

高表达骨钙素（osteocalcin）
低表达碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）
产生非常少量的I型胶原mRNA
表达T抗原（T-antigen）
表达骨桥蛋白（osteopontin）
表达神经抗原CD44
高表达缝隙连接蛋白43（connexin 43）
表达抗原E11

基因特征

缺乏可检测到的成骨细胞特异性因子2（Cbfa1/Runx2）的mRNA表达
SV40大T抗原在骨钙素启动子控制下表达，实现细胞永生化

功能特征

对机械刺激高度敏感
具有一定的成骨能力和骨吸收能力
能够分泌多种细胞因子和生长因子，参与骨重塑过程

其他特征

来源于14天龄(C57BL/6J x BALB/cJ)F2 Bgla启动子T-Ag转基因小鼠的长骨
性质与原代骨细胞非常相似，但与原代成骨细胞有所不同
适用于研究机械应力对骨细胞功能的影响
可用于研究骨细胞与其他骨细胞（如成骨细胞和破骨细胞）的相互作用

MLOY4细胞参数表

细胞名称	MLOY4细胞（小鼠骨样细胞系）
细胞别称	MLO-Y4 (Murine Long bone Osteocyte Y4)；MLOY4; MLO-Y4；小鼠骨样细胞
细胞来源	14日龄(C57BL/6J x BALB/cJ)F2 Bgla启动子T-Ag转基因小鼠长骨
细胞类型	小鼠骨样细胞
组织来源	骨
形态特征	上皮细胞样，贴壁生长，树突状
永生化方式	SV40大T抗原在骨钙素启动子控制下表达
培养基	MEMα + 10% FBS + 1% G/A (庆大霉素-两性霉素B混合溶液)
培养条件	37°C, 5% CO2, 95% 空气, 70%-80%湿度
特殊要求	需要用鼠尾胶原包被培养瓶
传代信息	周期48~72小时，比例1:2 (建议首次传代，T25培养瓶)
高表达标记物	骨钙素、连接蛋白43、抗原E11、T抗原、骨桥蛋白、神经抗原CD44
低/阴性标记物	碱性磷酸酶、I型胶原mRNA、成骨细胞特异性因子2 (Cbfa1/Runx2) mRNA
功能特性	对机械刺激高度敏感，具有一定的成骨能力和骨吸收能力
应用领域	骨细胞生物学研究、骨代谢研究、机械应力研究
冻存/保存	冻存液：90% 血清 + 10% DMSO；保存于液氮（-196℃）
检测项目	细菌、真菌、支原体、内毒素、细胞复苏活力、STR检测均通过
包装纯度	1×10^6 cells/ml, 1ml/T25；纯度99.99%
用途	仅用于科研，不可应用于治疗等其他方面

培养教程

MLOY4小鼠骨样细胞系培养教程

细胞复苏

收到MLOY4细胞后，用75%酒精消毒细胞瓶外表面。
将T25培养瓶放置于37°C培养箱中2-3小时，使MLOY4细胞逐渐恢复。
在显微镜下（4x或5x）观察MLOY4细胞状态，确保MLOY4细胞健康并记录图像（10x和20x各2-3张）。
检查MLOY4细胞的生长和贴壁情况。

细胞培养

低密度培养：如果MLOY4细胞密度低于60%，去除旧的培养基，加入6-8mL新配制的完全培养基，继续培养。
高密度培养：如果MLOY4细胞密度达到70%-80%，进行传代。
注意：运输中的培养基不可用于MLOY4细胞培养，需用新鲜配制的完全培养基。

细胞传代

第一次传代时，建议将T25培养瓶以1:2的比例传代MLOY4细胞。
如果因运输振动导致MLOY4细胞脱落，可通过离心回收这些MLOY4细胞。

细胞冻存

冻存液配方：90%血清 + 10% DMSO。建议现用现配，以保持MLOY4细胞冻存液的新鲜度。

注意事项

MLOY4细胞仅限于科研使用。
如发现培养瓶破损、液体溢出或MLOY4细胞污染，请立即拍照并联系供应商。
在运输过程中，MLOY4细胞可能会因振动而脱落或聚集成团，需特别注意。
定期观察MLOY4细胞状态，确保及时处理问题。

常见问题处理

培养基污染处理

立即隔离：将污染的MLOY4细胞培养瓶从培养箱中取出，防止扩散。
记录和拍照：详细记录污染情况，并拍照以备记录。
废弃处理：按照生物安全规程对污染的MLOY4细胞进行灭菌后废弃。
清洁消毒：彻底清洁和消毒相关设备，防止交叉污染。
检查原因：分析污染可能来源，如操作过程、试剂质量等。
重新培养：使用新无菌的培养基和器具重新开始MLOY4细胞培养。
预防措施：加强无菌操作技术，定期检查设备和试剂质量。

细胞贴壁不良处理

延长贴壁时间：将MLOY4细胞培养瓶放回37°C培养箱，延长贴壁时间至4-6小时。
增加血清浓度：短期内将血清浓度提高至15-20%以促进MLOY4细胞贴壁。
调整培养基pH：确保pH在7.2-7.4，可能需要调整CO2浓度。
使用细胞外基质：用胶原蛋白或纤连蛋白处理培养表面增强MLOY4细胞贴壁。
降低传代密度：若传代后MLOY4细胞贴壁不良，可适当降低传代密度。
检查培养基成分：确保营养成分充足以满足MLOY4细胞的需求。
避免机械损伤：操作要轻柔，避免对MLOY4细胞的过度震荡。
优化培养条件：调整温度、湿度等以确保MLOY4细胞的最佳生长环境。