ATT20细胞系是1966年从患有肿瘤的小鼠垂体中分离出，具有小而圆的细胞形态。

ATT20细胞系特征特性

• ATT20细胞能够分泌促肾上腺皮质激素(ACTH)。

• ATT20细胞表达促肾上腺皮质激素(ACTH)基因。

• ATT20细胞具有抗脊髓灰质炎病毒的能力。

• ATT20细胞被检测为鼠痘病毒阴性

ATT20细胞系参数表

细胞名称	AtT-20细胞（小鼠垂体瘤细胞）
细胞别称	AtT20; AtT 20; ATT-20；小鼠垂体瘤细胞
种属来源	小鼠
组织来源	垂体；瘤
生长特性	半贴半悬
细胞形态	圆形（成串）
细胞代数	10代以内
生物安全等级	1
染色体数目	64-66
培养基	F12K+2.5%FBS+15%HS+1%PS
培养条件	气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
传代密度	细胞密度达80%-90%
传代比例	首次传代建议1:2
冻存条件	无血清冻存液，液氮储存
细胞规格	1x10^6 cells/T25或1mL冻存管
支原体检测	无
污染检测	支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
保藏机构	ATCC; CCL-89 BCRC; 60244 ECACC; 87021902
基因表达情况	促肾上腺皮质激素 (ACTH)
抗病毒特性	能抗脊髓灰质炎病毒；鼠痘病毒阴性

AtT-20小鼠垂体瘤细胞培养教程

细胞复苏

• 将水浴锅预热至37℃。

• 用75%酒精擦拭超净工作台，确保无菌环境。

• 从液氮中取出AtT-20细胞，并迅速放入37℃水浴中快速解冻（约1-2分钟）。

• 将解冻后的AtT-20细胞悬液缓慢加入到含有预热培养基的培养瓶中，并轻轻摇晃，使AtT-20细胞均匀分散。

• AtT-20细胞的快速复苏是保持其活力的重要步骤。

日常培养

• 每2-3天更换一次培养基或添加新鲜培养基。

• 观察AtT-20细胞的生长状态，注意细胞团的形成。

• 定期观察AtT-20细胞的生长状态，以确保其在最佳条件下生长。

传代

• 当AtT-20细胞密度达到约1×10^6 cells/mL时进行传代。

• 轻轻摇晃培养瓶，使AtT-20细胞均匀悬浮。

• 取适量细胞悬液，用细胞计数板计数。

• 按1:3或1:4的比例稀释AtT-20细胞悬液到新的培养瓶中。

• 添加新鲜预热的培养基至适当体积。

细胞冻存

• 收集对数生长期的AtT-20细胞。

• 低速离心（约800-1000 rpm）5分钟，弃去上清。

• 用无血清冻存液重悬AtT-20细胞，调整密度至1×10^6 - 5×10^6 cells/mL。

• 将AtT-20细胞悬液分装到冻存管中。

• 使用程序降温盒或细胞冻存容器，将AtT-20细胞缓慢降温至-80℃。

• 24小时后转移到液氮中长期保存。

注意事项

• AtT-20细胞在培养时形成悬浮的细胞团，应避免过度吹打，以免破坏AtT-20细胞团结构。

• 定期检查AtT-20细胞是否有污染，包括支原体、细菌、酵母和真菌。

• 建议在10代以内使用AtT-20细胞，避免细胞老化和特性改变。

• 严格遵守无菌操作规程，避免交叉污染。

• 更换培养基时需小心，以避免将AtT-20细胞误倒。可采用离心法或自然沉降法进行。

培养基更换方法

• 离心法：将AtT-20细胞悬液转移到离心管中，低速离心（800-1000 rpm）5分钟，小心吸出上清，添加新鲜培养基重悬AtT-20细胞。

• 自然沉降法：将培养瓶静置15-30分钟，让AtT-20细胞自然沉降，小心吸出上层培养基，添加新鲜培养基。

生长观察

接种初期（0-24小时）

• AtT-20细胞呈单个悬浮状态或小的细胞团

• AtT-20细胞呈圆形，数量相对较少

对数生长期（24-72小时）

• AtT-20细胞开始形成更大的细胞团

• 细胞团数量增加，单个AtT-20细胞数量减少

• 细胞团大小不一

稳定生长期（72-120小时）

• AtT-20细胞团进一步增大，数量达到稳定

• 培养基中可能出现一些代谢产物

高密度期（120小时以上）

• 大量AtT-20细胞团悬浮在培养基中

• AtT-20细胞团可能会相互聚集形成更大的团块

• 培养基颜色可能发生变化，表明pH值改变